流式细胞术临床检验质量控制专家共识
## 一、人员与空间管理
（一）管理架构 应根据本医学实验室的实际情况设置质量管理架构，并成立质量管理小组。质量管理小组应由医学实验室负责人、技术负责人、质量负责人、生物安全负责人等职能岗位组成，定期召开管理会议，监督管理体系的执行情况及负责对质量管理进行持续改进 ［ 13 ］ 。质量管理小组成员应根据实验室的实际情况进行合理分工。为确保质量管理小组职能的独立性和管理的有效性，不建议一人兼任多个质量管理岗位。若因人员有限，出现了同一人兼任多个岗位的情况，但需在文件中明确区分每个岗位的职责，以确保不同质量管理职能独立执行，也应明确不同岗位的职责分工。如果实验室设有多个亚专业组，应优先考虑为每个亚专业组指定专门的技术负责人，或在职责说明中清晰划分各组的管理职责。 应在统一的质量管理架构下开展质量管理工作，设置符合项目实际情况的文件体系及职能分工 ［ 14 , 15 ］ 。与项目相关的操作规程文件应包括流式细胞仪器标准操作规程、流式细胞临床检测项目标准操作规程等；与项目相关的管理流程文件应包括岗位职责、检后标本处理流程、生物安全管理程序等；与项目相关的质量管理文件应包括室内质控管理程序、室间质评管理程序等。实验室负责人负责组织对项目操作人员进行培训、考核和授权，需定期组织开展项目的质量评价、改进工作。技术负责人负责制订项目的技术方案和实施，包括实验设计、样品处理、数据分析方案等，指导完成项目室内质控和仪器比对等日常质量管理活动。亚专业组可根据实际情况灵活设置质量管理员、生物安全管理员，并在质量管理小组的指导下开展质量管理工作。 （二）人员管理 实验室应建立人员管理程序，应有足够数量且有能力开展此项目的人员。从事FCM临床检测工作的人员应接受过规范化的流式细胞仪使用及数据分析培训，且要求其视力辨色度正常。对新上岗的工作人员，需在6个月内进行至少2次能力考核，考核合格后由医学实验室负责人进行岗位授权，方可独立开展检测 ［ 16 ］ 。当职责变更或离开岗位6个月以上再重新上岗时，或政策、程序、技术有变更时，应对相关技术人员进行再培训和再评估，合格后才可继续上岗。此外，还应定期（每年至少1次）对FCM检测操作分析人员进行培训及能力评估 ［ 17 ］ 。技术负责人应从事FCM临床检测相关工作3年以上。授权签字人应具备中级及以上专业技术职称资格，从事FCM临床检测相关工作至少3年 ［ 16 ］ 。 从事FCM临床检测工作的人员需熟悉掌握FCM检测原理、实验操作、影响因素、质量控制、设备操作标准规程、设备维护、试剂耗材储存、数据分析、结果报告、生物安全等内容，并积极参加相关领域继续教育活动，熟悉行业规范、指南以及专家共识，了解FCM和临床应用的最新进展。 （三）设施与环境 开展临床标本检测的实验室须按照《中华人民共和国传染病防治法》 ［ 18 ］ 、《医院感染管理条例》 ［ 19 ］ ，并参照CNAS-CL02-A001《医学实验室质量和能力认可准则的应用要求》 ［ 16 ］ 的相关要求，对实验室进行分区、设置工作环境及配置设施。应设置样品接收、标本处理、上机检测、样品存放等区域，并制订针对病原微生物危害的防护措施及生物危害的警告标识。应制订FCM检测实验室环境温湿度控制要求并记录。可根据流式细胞仪制造商声明的仪器工作环境要求制订仪器工作环境要求。但由于各流式细胞仪制造商声明的仪器工作环境要求不完全相同，本专家共识推荐的仪器工作环境温度宜控制在16~30 ℃ ［ 9 ］ ，相对湿度应在20%~80%（无冷凝），电源电压应在（220±22）V、（50±1）Hz范围内 ［ 20 ］ ，试剂应在2~8 ℃环境中保存。当温湿度失控时，应有处理措施并记录。应针对流式细胞实验室配置不间断电源或双路电源。应定期对实验室的安全风险进行评估，并有相应的防范措施。 共识1 实验室应建立以质量管理小组为核心的管理架构，明确各关键岗位的职责（如实验室负责人、技术负责人、质量负责人等），确保职能独立性和管理有效性。推荐强度：强推荐。 共识2 从事FCM临床检测人员应具备相应专业资质，技术负责人应具备3年以上工作经验，授权签字人应具有中级及以上职称并有3年FCM临床检测工作经验。新上岗人员需通过至少两次能力考核，合格后授权上岗，且每年进行至少一次培训和能力评估，确保其掌握FCM检测的关键技能。推荐强度：强推荐。 共识3 实验室应合理规划功能区域，确保样品接收、标本处理、检测和存储环节隔离，避免交叉污染。环境应满足仪器要求，推荐温度控制在16~30 ℃，推荐湿度控制在20%~80%（无冷凝），并配备不间断电源或双路电源。同时，实验室应实施病原微生物防护措施，定期评估并防范安全风险。推荐强度：强推荐。
## 二、标本管理
1.患者准备：若检测样本为外周血，采样前，应避免剧烈运动导致的细胞数量波动。对于3日内接受过免疫球蛋白输注治疗的患者，由于血液中大量游离的免疫球蛋白可能会抑制检测抗体对血细胞的标记，建议免疫球蛋白输注需至少3日后抽血送检 ［ 12 ］ 。 2.标本采集：样本来源较广泛，可为外周血、骨髓、脑脊液、穿刺或手术切除的组织样本等。对于外周血及骨髓样本可选择乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝管、肝素钠抗凝管或枸橼酸钠抗凝管进行标本采集。采集量2~4 ml，采集完毕后需立即颠倒混匀，防止出现凝块。EDTA抗凝标本可在室温下稳定保存12~24 h，肝素钠和枸橼酸钠抗凝标本可稳定保存48~72 h ［ 6 ， 12 ， 21 ］ 。对于脑脊液样本，一般不需要抗凝，抽取后置于新的一次性容器内尽快送检。为了尽可能保持细胞活性，建议采集后加入含适量血清（0.2% 小牛血清或者 10%胎牛血清）的培养基中，或者特殊的细胞保存液中 ［ 22 ］ 。对于穿刺或手术切除的组织样本，所需样本量的多少取决于样本的取材部位、样本的组织结构、细胞的脆性和对凋亡的敏感性等。FCM检测一般需要2×10 6的细胞量 ［ 23 ］ 。内镜下活检组织块标本推荐送0.5 cm以上的组织2块以上，手术切除标本推荐送1 cm以上的组织至少1块。对于纵隔或腹膜后等深部病变部位，样本取材首选粗针穿刺，建议送检2条组织以上；若为细针穿刺，推荐送检3~4条组织 ［ 23 ］ 。 3.标本运输：原则上，外周血、骨髓样本采集后应立即送检。对于无法及时完成检测或需要长途运输的标本，建议2~8 ℃保存 ［ 21 ］ 。脑脊液样本采集后应尽快送检，原则上采样后2~4 h 内送达，最迟不得超过 8 h，如使用特殊保存液可延长到18~72 h ［ 22 ］ 。标本送检时的运输温度以18~25 ℃为宜，不得高于25 ℃或者低于4 ℃ ［ 22 ］ 。组织样本采集后，应将样本置于生理盐水、RPMI-1640培养液或其他等渗缓冲液的可密封的清洁容器中，立即送检。若不能及时送检需要2~8 ℃低温保存运输 ［ 23 ］ 。为了延长细胞活性的保持时间，有条件的单位可以在RPMI-1640培养液中加入10%胎牛血清，或者使用组织样本专用的保存液。不能使用含甲醛等固定剂的溶液固定 ［ 23 ］ 。 4.处理流程：收到标本后核对患者信息是否具有唯一标识且信息完整。观察标本是否存在采血管错误、是否有凝块、是否超过了最长稳定保存时间等不合格情况。采血管错误、有凝块、超过稳定保存时间、标本标识不清等均应定义为不合格标本。若标本不合格，则进入拒收程序并及时通知临床，并建议重新按照合格样本的条件送检。若标本合格，则及时签收并进入检测流程。 共识4 实验室应根据不同样本类型采取适当的标本管理措施。外周血和骨髓样本使用合适抗凝管（EDTA、肝素钠或枸橼酸钠）采集2~4 ml并立即混匀后立即送检；脑脊液和体液样本应尽快送检，采集后2~4 h内送达，最迟不超过8 h，如使用特殊保存液，可延长至18~72 h；组织样本采集后应置于生理盐水、RPMI-1640培养液或其他等渗缓冲液的密封清洁容器中，立即送检；对于无法及时完成检测或需要长途运输的外周血、骨髓、组织标本，建议在2~8 ℃条件下保存运输，对于脑脊液标本送检时的运输温度推荐以18~25 ℃为宜，不得高于25 ℃或者低于4 ℃；标本接收单位应注意判断标本是否合格，确保无凝块或超期等问题，不合格标本按拒收处理，合格标本则应及时签收并进入检测流程。推荐强度：强推荐。
## 三、试剂与耗材
实验室应制订试剂和耗材的管理程序。应确保所有试剂和耗材都有明确的采购、存储、使用和废弃流程，应在符合生产商要求的环境条件下储存，并定期进行效期检查。FCM临床检测所需的常用试剂与耗材包括荧光素标记的单克隆抗体、细胞质控物、溶血素、缓冲液、流式管、微球等。检测试剂和耗材应符合国家医疗器械注册要求。推荐使用制造商推荐使用的配套溶血素，并遵循试剂说明操作 ［ 17 ］ 。非配套溶血素使用前需与配套溶血素同步检测比对，以配套溶血素结果为参考，变异系数（coefficient of variation， CV）建议≤15%或符合实验室自定要求。 共识5 实验室应制定严格的试剂和耗材管理程序，FCM临床检测所使用的试剂和耗材应符合国家医疗器械注册要求。推荐使用制造商推荐的配套溶血素，并严格按照试剂说明书操作。若使用非配套溶血素，应与配套溶血素进行比对，确保 CV≤15%，或符合实验室自行设定的标准。推荐强度：强推荐。
## 四、仪器管理
（一）仪器的维护与维修 实验室应按照流式细胞仪操作说明书建立仪器的标准操作规程，制订维护保养计划，每次开关机前应进行仪器保养维护和日常清洗，并按计划进行周保养、月保养，做好相关记录 ［ 24 ］ 。 当流式细胞仪发生故障后，应首先分析故障原因，FCM检测人员应熟悉常见仪器故障原因及排除方法 ［ 24 ］ 。当仪器故障影响检测性能时，应立即停止使用，并将仪器标记为停用状态。故障修复后，可通过仪器校准、质控物检测、留样再测或与其他性能良好的流式细胞仪比对，以验证仪器性能是否满足要求。 （二）仪器校准 实验室应建立仪器设备的校准程序，制订校准计划。流式细胞仪的校准参数和要求应按照JJF 1665-2017《流式细胞仪校准规范》 ［ 11 ］ 中的要求，校准参数至少应包含仪器的分辨力、检出限、线性相关系数、漂移、重复性、示值误差等。应确认校准物的溯源性并保存相关证明材料，做好相关记录，并出具仪器校准报告。 流式细胞仪在首次使用前、仪器进行了重大维修与升级（比如激光器、光电检测器更换，以及升级激光器等）、发生搬移等情况时，都应进行仪器校准，当校准参数符合要求后方可用于临床检测。 1.分辨力：待仪器预热完成后，将荧光微球标准物质充分混匀后上机检测。收集各门内有效信号10 000个，计算各通道标准微球全峰宽的 CV值。前向角散射光（forward scatter，FSC）、FITC、PE三项的 CV应≤3% ［ 20 ］ ，其他荧光素应满足制造商申明的要求。 2.线性相关系数与荧光检出限：将标准微球充分混匀后上机进行测试，收集不少于 10 000 个标准微球信号，对试验结果进行直方图分析，得到各个峰的平均荧光强度；根据标准微球说明书提供的各个峰的等量可溶性荧光分子（molecules of equivalent soluble fluorochrome，MESF）数，以及分析得到的各峰的平均荧光强度，取常用对数（Log值），以 lg（MESF）数为“ y”， lg（FITC）、 lg（PE）等为“ x”，得到线性回归方程及线性相关系数（ r）。荧光强度线性相关系数（ r）应≥0.98 ［ 20 ］ 。 根据上述回归方程，计算无荧光标记的空白微球的平均荧光强度值对应的MESF即为荧光检出限（LOD） ［ 11 ］ 。FITC的荧光检出限应≤200 MESF，PE的荧光检出限应≤100 MESF ［ 20 ］ ，APC的荧光检出限应≤200 MESF ［ 12 ］ ，其他荧光素的检出限应符合制造商申明。 3.漂移：在稳定的环境温度下（温度波动不超过±3%） ［ 11 ］ ，将标准微球充分混匀后上机进行检测，利用直方图分析检测结果，计算标准微球的平均荧光强度值（FL 0）；连续开机2 h后，在相同流式细胞仪设置和荧光通道电压值的条件下重复前述步骤，得到标准微球的平均荧光强度值（FL 1）；按公式（1）计算相对漂移率（D）以体现仪器稳定性。FSC及所有荧光通道峰值荧光的波动范围应不超过±10% ［ 11 ， 20 ］ 。 D=（FL 1-FL 0）/FL 0×100% 公式（1） 4.重复性与示值误差：将淋巴细胞标准物质标记好CD4抗体后上机测试，收集10 000个以上门内有效信号。重复测定6次，依次记录每次CD4阳性细胞占总淋巴细胞的百分比，计算平均值与 CV值。阳性细胞百分比大于等于30%时， CV值应≤8%；或阳性细胞百分比小于30%时， CV值应≤15%。淋巴细胞标准物质CD4阳性细胞所占比例与平均值之差，即为示值误差 ［ 11 ， 20 ］ 。 应记录和保存校准因子的变化，并进行校准验证，明确校准状态和校准效期。流式细胞仪的校准具有时效性，建议每年至少进行1次校准 ［ 11 ］ 。实验室可根据仪器使用的频率、仪器状态等因素来调整复校时间。 （三）仪器性能验证 实验室应建立仪器性能验证程序，流式细胞仪性能验证的参数和要求可参照YY/T 0588-2017《流式细胞仪》 ［ 20 ］ 标准、WS/T 360-2024《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》 ［ 12 ］ 和制造商的说明书。需做好相关记录，并出具性能验证报告。 流式细胞仪首次使用前、仪器进行了重大维修与升级（比如激光器、光电检测器更换，以及升级激光器等）、发生搬移、系统更新、性能出现问题等情况时，都应进行性能验证，当验证参数结果符合要求后可用于临床检测。 验证参数包括但不限于：分辨力（包括散射光分辨力和荧光通道分辨力）、灵敏度（包括散射光检出限和荧光检出限）、荧光通道线性、仪器稳定性、携带污染率等。其中荧光通道线性在仪器使用过程中每年至少进行1次验证。 1.分辨力：流式细胞仪荧光通道的分辨力性能验证方法与仪器校准中分辨力的试验方法相同。同时还应进行散射光分辨力验证。利用枸橼酸钠抗凝新鲜全血，混匀后，上机检测，以检查FSC和侧向角散射光（side scatter，SSC）点图是否可以将血小板和红细胞分开（ 图1A ）；利用乙二胺四乙酸抗凝全血，溶解红细胞后上机检测，检查FSC和SSC点图是否可以将白细胞三群（淋巴细胞、单核细胞、粒细胞）分开（ 图1B ）。 图1 前向角散射光和侧向角散射光所成血小板、红细胞、白细胞分群图（A为血小板与红细胞分群，B为白细胞分群） 2.散射光检出限：检测充分混匀后的标准微球，在直方图上显示标准微球峰值信号，查看显示峰值信号对应的微球直径。散射光检出限应≤1 μm ［ 20 ］ 。 3.荧光检出限及荧光通道线性：其性能验证方法同仪器校准中的线性相关系数与检出限的试验方法。 4.仪器稳定性：其性能验证方法同仪器校准中的漂移的试验方法。两次检测间隔的时间为8 h ［ 12 ］ 。 5.表面标志物检测的重复性：其性能验证方法同仪器校准中重复性的试验方法。 6.携带污染率：使用浓度为（5 000~10 000）个/μl的标准微球上机进行测试，至少收集 100 000 个标准微球，连续测试 3 次，计算标定区域的颗粒数，分别记为 H1、H2、H3；再进行空白数量测试（收集 30 s），连续测试 3 次，计算标定区域的颗粒数，分别记为 L1、L2、L3；按公式（2）计算携带污染率。按照此程序循环 3 次，取携带污染率最大值。携带污染率应≤0.5% ［ 20 ］ 。 携带污染率=（L1-L3）/（H3-L3）×100% 公式（2） 共识6 实验室应建立仪器标准操作规程，制定仪器维护保养计划，定期进行日、周、月保养，并做好记录。操作人员应熟悉仪器常见故障及排除方法，出现影响仪器检测性能的故障时，应立即停用并标记，修复后通过校准、质控或比对验证性能，确保仪器正常运行。推荐强度：中推荐。 共识7 实验室应建立仪器的校准程序，按要求开展仪器的校准。校准参数包括分辨力、检出限、线性相关系数、漂移、重复性、示值误差等，这些指标的结果应符合实验室制订的校准要求。在仪器的首次使用、重大维修、升级或搬移后，都应进行校准，且建议每年至少校准一次。校准过程中，应确认校准物的溯源性，保存相关记录，并出具校准报告。当校准参数符合要求后，方可用于临床检测。推荐强度：强推荐。 共识8 实验室应建立仪器的性能验证程序，按要求开展仪器的性能验证。验证参数包括分辨力、灵敏度、荧光通道线性、仪器稳定性、携带污染率等，这些指标应符合实验室制订的性能验证要求。在仪器的首次使用、重大维修、搬移或系统更新后，都应进行性能验证，且建议每年至少对荧光通道线性进行一次验证。性能验证过程中，应保存相关记录，并出具性能验证报告。当验证参数结果符合要求后可用于临床检测。推荐强度：强推荐。
## 五、项目管理
（一）检测项目 实验室应根据临床需求，设置开展合适的流式细胞临床检测项目及报告内容。目前临床主要开展的流式细胞临床检测项目一般可以分为功能评价性项目和辅助诊断性项目，主要包括淋巴细胞亚群、精细化免疫细胞亚群、嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）-T 细胞免疫治疗相关检验、血液肿瘤免疫表型分析、微小残留病（minimal residual disease，MRD）检测、CD34 +细胞绝对计数、阵发性睡眠性血红蛋白尿（paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH）克隆检验等。 1.淋巴细胞亚群检测：项目内容一般包含 ［ 6 ， 12 ， 25 , 26 ］ ：T细胞、B细胞、NK细胞等。实验室可根据临床需求设置报告内容。报告内容可以包括淋巴细胞总数、CD3 +T细胞、CD4 +T细胞、CD8 +T细胞、B细胞、NK细胞、CD4 +CD8 +T细胞、CD4 -CD8 -T细胞的相对计数（百分比）和绝对计数（绝对值），以及CD4 +/CD8 +T细胞的比值等内容。该项目在健康管理 ［ 25 ］ 、血液肿瘤 ［ 6 ］ 、感染性疾病 ［ 27 ］ 、免疫缺陷性疾病 ［ 28 , 29 ］ 等领域均有广泛的应用 ［ 30 ］ 。 2.精细化免疫细胞亚群检测：该项目是在传统的淋巴细胞亚群检测项目的基础上，增加了调节性T细胞、树突状细胞、髓源性抑制细胞等各类免疫细胞，以及检测其分化发育、功能、活化、增殖、衰老、耗竭状态相关标志物，并进一步分析更多的免疫细胞亚群 ［ 31 ］ ，可用于实体肿瘤患者的免疫状态评价、预后评估、辅助免疫检查点抑制剂的疗效监测等 ［ 32 ］ ，实验室可根据临床需求开展。 3.CAR-T 细胞免疫治疗相关检验 ［ 33 ］ ：项目包括靶点筛查、CAR-T细胞产品成分鉴定、毒性预估、CAR-T细胞监测、MRD检测、免疫功能评价、免疫检查点和免疫抑制微环境检测、细胞因子相关检测等。用于CAR-T治疗前靶点筛查、回输前产品质量评估、回输后疗效和毒副作用监测，以及长期随访免疫功能变化等情况，特别在复发病例中意义重大 ［ 33 ］ 。报告内容应包括靶点抗原的表达率、表达强度，推荐在报告中提供彩色图表，直观展现数据结果 ［ 33 ］ 。 4.血液肿瘤免疫表型分析：已经成为白血病、淋巴瘤、骨髓瘤等淋巴造血系统肿瘤诊断、分型及与非造血系统肿瘤鉴别的重要手段 ［ 30 ， 34 , 35 , 36 , 37 , 38 , 39 , 40 ］ 。报告时需全面且客观地阐述所观察到的细胞百分比及其抗原表达特性。针对阳性结果标本，应详细描述异常细胞占总体有核细胞的百分比，明确指出抗原是否表达及其表达的强度，并简要概述其他细胞的特征。若存在多群肿瘤细胞，则需分别进行描述，以确保数据的准确性和完整性。在未检测到异常细胞的情况下，应对主要细胞群体，包括淋巴细胞、原始细胞、粒细胞、单核细胞及有核红细胞，进行比例分析并简述其抗原表达情况。结论部分应精炼地总结是否存在异常细胞，以及这些细胞的比例和性质特征，依据肿瘤细胞与相关细胞群体的比例，参照世界卫生组织的造血与淋巴组织肿瘤分类诊断标准或权威组织最新的行业标准与指南，为疾病的诊断提供意见。为增强报告的可读性和科学性，建议附上全部的检测标志图谱及各细胞群体的彩色图片，确保图片能清晰、全面地展示内对照与肿瘤细胞的表达状态 ［ 30 ， 39 ］ 。 5.MRD检测：已经成为白血病、淋巴瘤、骨髓瘤等淋巴造血系统肿瘤疗效监测的重要手段 ［ 41 , 42 , 43 , 44 ］ 。在报告时，须报告获取标本中的白细胞或有核细胞的总数。若MRD检测结果呈阳性，报告需详尽阐述检测到的异常细胞数量，并计算这些异常细胞在白细胞或有核细胞总体中所占的百分比。报告内容还应包含一系列散点图，这些图表应清晰地区分并高亮显示异常细胞群体与正常细胞群体，直观展现它们在抗原表达及散射光信号上的差异 ［ 42 ］ 。 6.CD34 +细胞绝对计数：用于评估造血干细胞动员效果并预判采集时机，以及评价采集结果的重要手段 ［ 45 ］ 。推荐采用血液病治疗与移植国际联合会（International Society of Hematotherapy and Graft Engineering，ISHAGE）的双平台检测法或单平台检测法。双平台ISHAGE法可报告CD34 +细胞百分比及绝对数，ISHAGE单平台法可报告CD45 +细胞绝对数、CD34 +细胞百分比及绝对数、活CD45 +细胞和CD34 +细胞绝对数 ［ 46 ］ 。 7.PNH克隆检测：用于PNH的诊断与PNH克隆的筛查 ［ 47 ］ 。报告内容应详尽地涵盖红细胞的分析结果，需分别体现Ⅱ型与Ⅲ型红细胞的克隆大小，以及（Ⅱ+Ⅲ）型的克隆大小。对于白细胞部分，应分别报粒细胞和单核细胞的总PNH克隆比例 ［ 47 ］ 。 鉴于国内除淋巴细胞亚群检测、CD34 +细胞绝对计数项目外，其他项目目前无可参加的室间质评的情况，建议开展这些项目的实验室应与其他开展相同检测项目（且检测方案相同）的实验室进行比对，以保证结果的准确性。 （二）检测系统的性能验证 实验室应建立检测项目的性能验证程序，流式细胞临床检测项目性能验证的参数和要求可参照相关指南、共识和制造商的说明书，并需做好相关记录。 检测项目应用于临床检测前、检测系统发生变更（如更换设备、试剂等）、仪器重要检测部件维修或更换时须进行检测系统的性能验证，当验证参数结果符合要求后可用于临床检测。 建议使用配套试剂盒开展性能验证，验证参数应包含正确度、精密度、线性范围等。 1.正确度：对于定量项目，可采用包含正常和异常浓度水平的具有溯源链的定值样品验证正确度，每一样品重复测定3次，每次测量值均在给定范围内且3次测量值的均值与标准值的偏倚在允许范围内为通过 ［ 12 ］ 。 2.精密度：批内精密度可采用5个新鲜血标本（覆盖高中低水平），由同一工作人员采用同一批次试剂处理并在同一仪器进行检测，每个标本重复操作3次，计算所有标本的平均 CV， CV宜<10%，不应超过20%。日间精密度可采用正常和异常两个浓度的全血质控物，每天重复检测3次，至少重复4天，计算每个质控物的平均 CV和2个浓度质控物的总平均 CV， CV宜<10%，不应超过20% ［ 12 ］ 。 3.线性范围：适用于流式细胞临床检测含绝对计数的项目。利用高值标本（检测范围上限值附近）进行倍比稀释后，进行染色、检测，每个标本重复4次，取均值。将理论值与实测均值进行线性回归分析，计算相关系数 r。相关系数（ r）应≥0.975 ［ 12 ］ 。 （三）生物参考区间的建立与验证 对于淋巴细胞亚群检测类的以数值呈现的流式细胞临床检测结果的项目，实验室使用本实验室自行建立的检测项目结果的参考区间时，参考区间制订过程应符合国家卫生行业标准WS/T 402《临床实验室检验项目参考区间的制订》 ［ 48 ］ 的要求，并定期对参考区间进行验证和更新。当实验室使用来自权威资料的参考区间时，应对参考区间进行验证。参考区间应区分成人和儿童群体 ［ 49 ］ 。 参考区间验证 ［ 48 ］ ：参考区间的验证至少采用20名健康参考个体（性别、年龄分布应均衡）进行测试。要求参考个体能合理地代表实验室所选定的健康人群，并且符合实验室制订的纳入、排除和分组标准。若20名参考个体中不超过2名的观测值在参考限之外，则该参考区间可以接受；若在20名参考个体中有3名及以上的观测值超过参考限，那么就需要重新选择20名参考个体再次进行验证，如果再次验证后仍有超过3名及以上的观测值超过参考限，则需重新建立参考区间。如果实验室检验程序或检验方法发生变更，需要重新对参考区间进行验证。 （四）结果报告与临床沟通 报告内容应包括患者姓名、ID、标本采集时间和结果报告人及结果报告时间、报告内容、参考区间。应加强实验室信息系统中检验报告结果与原始结果一致性的核对，并建立防止数据传输错误的程序文件和记录。实验室信息系统中应能显示患者的历史数据。结果分析时若确定存在异常细胞群，还应补充异常细胞群的百分比、免疫表型信息，并提供可能的专业判断。发现其检测结果变化的临床意义有可能影响疾病的诊断、治疗方案的调整时，应及时与临床沟通。 （五）数据管理 相关实验室数据管理应遵循真实、记录、存储、安全和解释的原则，对数据进行详细记录和妥善存储的同时，设置数据访问权限，确保数据的安全性和机密性。检测结果数据与实验室信息系统数据备份方式相同，标本FCM检测后的原始数据文件应定期备份，应杜绝有安全隐患的外存储器连接流式细胞仪控制电脑。 数据保存期限：实验室应该建立有效的记录保存系统，包括质控数据、测试结果、仪器维护记录、试剂批次号等，都应至少保存2年 ［ 12 ］ ，以保证追踪和复审检测结果 ［ 50 ］ 。 共识9 实验室应根据临床需求，设置开展合适流式细胞临床检测的项目及报告内容。功能评价性流式细胞检测应主要用于免疫功能评估和治疗监测。淋巴细胞亚群检测可报告T细胞、B细胞、NK细胞的相对和绝对数量，根据疾病需求可报告双阴性或双阳性T细胞。精细化免疫细胞亚群检测是在淋巴细胞亚群基础上增加了调节性T细胞、树突状细胞、髓源性抑制细胞等各类免疫细胞，以及检测其分化发育、功能、活化、增殖、衰老、耗竭状态相关标志物，可用于实体肿瘤免疫状态评估及免疫检查点抑制剂疗效监测。CAR-T 细胞免疫治疗相关检测包含了靶点筛查、CAR-T细胞产品成分鉴定、毒性预估、CAR-T细胞监测、MRD检测、免疫功能评价、免疫微环境研究等内容，主要用于CAR-T治疗疗效及毒性不良反应监控。CD34 +细胞绝对计数主要用于造血干细胞动员阶段的效果评估、采集过程中的数量监测，以及对移植后的临床结局预测，检测时应严格采用标准化方法。推荐强度：强推荐。 共识10 对于辅助诊断性流式细胞检测项目一般聚焦于疾病诊断与分型。血液肿瘤免疫表型分析需全面记录细胞百分比及抗原表达特性，对异常细胞群的比例、抗原强度进行详细描述，同时附图直观展示并为疾病的诊断提供参考意见。MRD检测应准确标注异常细胞数量及其在有核细胞中的占比，并结合散点图直观区分正常与异常细胞。PNH克隆检测用于PNH的诊断与PNH克隆的筛查，需报告红细胞和白细胞克隆大小及分布。辅助诊断性的检验项目提供图文报告，文字部分包括一般信息、方法、结果与结论，同时附带涉及所有检测标志的彩色全图。推荐强度：中推荐。 共识11 实验室应建立完善的流式细胞检测系统性能验证程序，并严格执行。检测项目在临床应用前、更换设备或试剂、仪器维修后需进行性能验证，验证内容包括正确度、精密度及线性范围。对于淋巴细胞亚群检测类的以数值呈现的流式细胞临床检测结果的项目，实验室应确定本实验室检验项目结果的参考区间，参考区间的制订与验证应符合行业标准，并区分成人与儿童群体。参考区间验证要求至少采用20名健康参考个体（性别、年龄分布应均衡）进行测试，观察值超过标准需重新验证或制订区间。检测结果报告需完整记录患者信息及参考区间，数据分析需准确补充异常细胞群信息，并与临床及时沟通。实验室需确保数据真实、安全、可追溯，并妥善保存原始数据和记录至少2年，杜绝外部存储设备连接，保障数据安全性。推荐强度：强推荐。
## 六、室内与室间质量控制
（一）室内质量控制 开展流式细胞临床检测的实验室应制订室内质量控制程序，室内质量控制应包括从实验室接收标本到发布报告的全过程。 1.每日质控检测：（1）质控微球检测：每日开机初始化后，需使用厂家推荐的质控荧光微球和质控软件对仪器激光功率、荧光通道 CV及电压变化值等进行检测，检测结果应符合厂家推荐使用要求。（2）细胞质控物检测：应选择商品化的细胞质控物。一般实验室可以选择类型为高值的细胞质控物，艾滋病检测实验室应同步选择低值和高值2种类型的细胞质控物。每日检测样品之前，应检测细胞质控物。根据质控结果绘制Levy-Jennings质控图，同时采用Westgard质控规则（建议至少使用1 3s、2 2s规则）进行质控结果分析。确认质控在控后，才能进行当日的标本检测。 2.结果报告时的质控：结果报告时，需分析结果的可靠性 ［ 51 , 52 , 53 ］ 。如：T、B和NK细胞相对计数的总和应占淋巴细胞总数的100%±5%范围内；CD4 +T细胞和CD8 +T细胞百分比的总和正常情况下应等同于CD3 +T细胞的百分比，变化范围在5%~10%内 ［ 12 ］ 。标本中该细胞群阳性率大于30%前提下，多管 CV值应不大于8%，标本中该细胞群阳性率小于30%时，多管 CV值应不大于15% ［ 20 ］ 。 3.失控后的管理与改进：出现失控情况时，必须立即查找、分析导致失控的原因，采取纠正措施，评估失控对检验结果的影响，并及时填写失控记录表。如果失控类型为随机误差，则需复查质控物，复查结果在控后，即可进行标本检测；如果复查结果仍然失控或失控类型为系统误差，则需对仪器、试剂等检测体系进行排查，查找原因并纠正，同时对以往标本检测结果的准确性进行评估，如有必要需召回报告并重新检测。必要时还需启动针对性的预防措施，防止同类问题再次发生。 （二）室间质量评价 开展流式细胞临床检测的实验室应制订室间质量评价程序，定期参加室间质评或能力验证计划。质评标本的检测流程应与临床标本的检测流程保持一致，以确保检测结果的可比性和真实性。应及时反馈室间质量评价结果，总结经验并改进检测方法，具体要求包括反馈分析、根本原因分析、纠正措施、预防措施以及所有质量保证活动和改进措施的记录。 （三）实验室比对计划 1.人员比对：需定期（建议每年至少2次）对不同检测人员进行比对。比对标本数建议≥5份新鲜全血或骨髓标本（须包含2份正常标本，3份异常标本）和2份不同浓度水平的全血质控物，比对内容包括标本处理、数据分析、结果报告等，标本上机在同一台仪器进行。计算不同检测人员间检测结果的相对偏差或绝对偏差 ［ 10 ］ ，偏差应≤20%或符合实验室自定要求 ［ 12 ］ 。 2.仪器间比对：需定期（建议每年至少2次）对不同仪器检测进行比对 ［ 12 ］ ，比对标本数量和类型要求同“人员比对”。使用同种试剂，按标准操作流程进行标本处理后同时上机检测。以性能良好、规范开展室内质量控制、室间质量评价成绩合格的仪器的检测结果作为参考，计算对比仪器检测结果的相对偏差或绝对偏差，偏差应≤20%或符合实验室自定要求 ［ 12 ］ 。 共识12 开展流式细胞临床检测的实验室应制定全面的质量控制程序，包括室内质量控制、室间质量评价及实验室比对计划。室内质控需覆盖从标本接收到报告发布的全过程，每日使用质控微球和细胞质控物检测仪器性能及检测可靠性，并通过Levy-Jennings质控图及Westgard质控规则监控质控结果。失控时需及时分析原因并采取纠正措施，必要时召回报告并重新检测。室间质量评价需定期参加质评计划，保证检测结果的可比性，并对质评反馈及时分析、改进方法。实验室比对计划需每年至少进行两次，包括人员间比对和仪器间比对，采用新鲜标本及质控物计算结果偏差，偏差应≤20%或符合实验室自定要求。推荐强度：强推荐。 随着流式细胞术的不断发展和临床应用需求的日益增长，流式细胞学在疾病诊断、治疗监测、预后评估等方面的应用具有广阔前景。未来，随着更先进的多参数流式细胞分析技术的普及，光谱流式、质谱流式，标本自动前处理系统及人工智能辅助的流式细胞分析技术的出现，流式细胞术检测的标准化和规范化未来或将成为重要发展方向。然而，伴随技术的进步，流式细胞学临床应用的质量控制面临更大的挑战和更高的要求。如何在检测复杂性提升的同时，确保数据的准确性、可重复性和跨实验室的标准化，仍然是未来发展的重点。因此，持续完善相关质量控制体系，优化检测流程，加强实验室间的交流与合作，建立统一的检测标准，将是未来流式细胞学临床检测发展的必然趋势。本共识的提出，将为流式细胞学在临床中的规范化操作及应用提供指导。 执笔人（按姓氏汉语拼音排列）：陈双（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心）、陈炜烨（广东省中医院检验科）、程沈菊（昆明医科大学第一附属医院医学检验科）、龚容（昆明医科大学第一附属医院医学检验科）、蒋亭亭（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心）、李轶勋（昆明医科大学第一附属医院医学检验科）、林灿（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心）、刘耀（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心）、彭余（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心）、唐鑫怡（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心）、王卉（河北燕达陆道培医院检验科）、吴丽娟（西部战区总医院实验室医学中心）、武坤（昆明医科大学第一附属医院医学检验科）、杨曦明（北京中医药大学东直门医院检验病理科）、杨再林（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心）、赵明宇（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心） 专家组成员（按姓氏汉语拼音排列）：陈继德（重庆市璧山区人民医院检验科）、陈曼（河北燕达陆道培医院检验科）、陈朴（复旦大学附属中山医院检验科）、陈姝樾（重庆市人民医院医学检验科）、陈鑫（漯河市中心医院血液内科血液病实验室）、程薇（河南省人民医院血液病研究所）、池沛冬（中山大学肿瘤防治中心检验科）、褚帅（南方医科大学南方医院检验医学科）、邓燕（广西医科大学第一附属医院检验科）、范娜（重庆市公共卫生医疗救治中心医务科）、高山（空军军医大学第一附属医院血液内科）、葛晓军（遵义医科大学第二附属医院检验科）、谷钰峰（烟台毓璜顶医院检验科）、郭吉寅（昆明医科大学第三附属医院检验科）、何淑娅（四川省肿瘤医院检验科）、何晓燕（重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学检测中心）、何永鹏（重庆大学附属肿瘤医院医学检验科）、胡建娥（重庆大学附属三峡医院医学检验科）、胡维波（重庆市荣昌区人民医院医学检验科）、黄昕（浙江大学医学院附属第一医院血液科）、黄裕林（重庆市开州区人民医院输血科）、蒋朝晖（贵阳市第一人民医院医学检验科）、孔义华（贵州医科大学第二附属医院检验科）、李国盛（山东大学齐鲁医院血液科）、李进（重庆医科大学附属大足检验科）、李力（解放军南部战区总医院血液科）、李莲（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心）、李良梅（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心）、李娓娜（济南市中心医院医学实验诊断中心）、李壹（四川大学华西医院实验医学科）、李珍（南方医科大学南方医院血液科）、李智伟（新疆维吾尔自治区人民医院临床检验中心）、林昌海（重庆大学附属肿瘤医院检验科）、刘康（湖南省湘潭市中心医院血液科）、刘灵（陆军军医大学第一附属医院预防保健科）、刘玲（重庆两江新区人民医院医学检验科）、刘文（川北医学院附属医院检验科）、吕敬龙（重庆大学附属三峡医院血液科）、马雷（重庆医药高等专科学校附属医院检验科）、毛霞（华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科）、牟思华（浙江省台州市立医院检验科）、倪万茂（浙江省人民医院病理科）、聂祖庆（昆明医科大学第二附属医院检验科）、彭贤贵（陆军军医大学新桥医院血液病医学中心）、冉隆荣（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心）、冉桥生（陆军军医大学第二附属医院检验科）、任方刚（山西医科大学第二医院血液科实验室）、孙真真（河南科技大学第一附属医院检验科）、王平（陆军军医大学新桥医院血液病医学中心）、王伟（贵州医科大学附属肿瘤医院检验科）、文丰（重庆大学附属黔江医院医学检验科）、吴青青（贵州医科大学附属医院临床检验中心）、吴雪莲（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心）、席倩（四川省人民医院临床医学检验中心）、徐翀（上海市临床检验中心临床血液体液学研究室）、徐正良（云南省第三人民医院检验科）、杨礼志（红河哈尼族彝族自治州第三人民医院检验科）、杨峥（广西医科大学第一附属医院检验科）、姚强（广东省深圳市儿童医院检验科）、余建华（东莞康华医院检验科）、余艳艳（湖南省胸科医院检验科）、岳龙涛（山东中医药大学附属医院血液诊断实验室）、詹茜（重庆医科大学附属第一医院临床分子医学检测中心）、张爱梅（中国科学技术大学附属第一医院检验科）、张海龙（贵州省安顺市人民医院检验科）、张萍（重庆医科大学附属第二医院血液科）、张芹（云南省第一人民医院检验科）、张伟（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心）、张晓录（烟台毓璜顶医院检验科）、张云（山东省济南市章丘区人民医院检验科）、赵仁彬（云南省第一人民医院血液科）、赵玉洁（遵义医科大学附属医院检验科）、周丽君（山东大学附属威海市立医院检验科）、周茂华（广州医科大学附属番禺中心医院检验科）、朱杰（大连医科大学附属第二医院检验科）、朱明霞（北京大学第三医院血液科）、庄振超（艾迪康医学检验中心流式细胞实验室）、左曙光（柳州市柳铁中心医院中心实验室） 参考文献（略） 扫码阅读全文 《中华检验医学杂志》2025年报道计划
引用 / 出处
中华检验医学杂志. 流式细胞术临床检验质量控制专家共识[S/OL]. 2025.