流式细胞术临床检验图文报告书写专家共识

专家共识检验病理科 · 2024 · 中华检验医学杂志

## 一、FCM临床检验报告的基本信息

FCM临床检验报告的基本信息主要包括患者信息、临床信息、申请信息、样本信息共4个部分。（1）患者信息：包括姓名、性别、年龄、科室、床位号、身份识别号（住院号和/或门诊号）等；（2）临床信息：主要是临床诊断（也可注明主诉症状和/或特殊治疗信息）；（3）申请信息：包括申请医师、申请科室、申请检验项目等；（4）样本信息：包括样本唯一识别号、样本类型（必要时注明抗凝剂类型）、采集时间、接收时间、报告时间等。如有其他可能影响检验结果的相关信息（如特殊治疗或样本状态）应予以备注［ 2 , 3 , 4 ， 8 , 9 ］。

## 二、FCM临床检验报告的方法学描述

FCM临床检验报告的方法学描述包括：仪器及试剂信息、荧光素标记抗体组合方案、样本制备方法和样本检验信息等。针对不同的检验目的和实验室检验设备的适用性，FCM检验方案在实际应用中具有较高的灵活性和差异性。因此对于检验方案复杂的FCM临床诊断项目（如免疫分型和MRD）的检验报告，需进行方法学描述，以供实验室间交流及结果互认；对于非诊断性FCM检验项目（如免疫细胞亚群）报告，因靶标和抗体方案具有一定通用性，可不描述或简要描述方法学。 1.仪器与试剂：各型号的流式细胞仪性能不同，建议在检验方法中注明制造商、型号、分析软件［ 3 ， 8 ， 16 , 17 , 18 , 19 ］。检验方案中的主要荧光素标记抗体需注明厂家与荧光素；对疾病具有重要诊断价值的抗体如浆细胞肿瘤CD38多表位抗体，需注明抗体类别和克隆号［ 19 ］；其他试剂如溶血素、破膜剂、固定剂等注明厂家或配制方法。 2.荧光素标记抗体组合方案：由于不同荧光素波谱之间存在相互重叠的现象，荧光素在组合时需要进行补偿调节，以纠正光学检验器间由于荧光叠加造成的检验误差，而荧光素的组合、补偿调节方案均会影响荧光信号的检验结果，因此建议提供每个检验管荧光素标记抗体的组合方案［ 1 ， 5 ， 16 , 17 ］，可在FCM图片上注明。 3.样本制备方法：（1）常规方法：外周血和骨髓样本的常见染色步骤为抗体标记、裂解红细胞、免洗或洗涤［ 5 ， 12 ， 17 ］；也可采用裂解红细胞、洗涤、抗体标记、洗涤［ 19 ］；或（孵育）洗涤、抗体标记、裂解红细胞、洗涤［ 1 ］等方法，以达到最佳检验效果。（2）胞浆抗体染色：胞浆抗体需破膜处理［ 5 ， 8 , 9 ］，对破膜剂和破膜方法需进行描述。（3）对特殊样本的制备方法应进行描述，如脑脊液样本需离心富集待检细胞、组织样本需制备单细胞悬液（研磨或解离后过滤），根据需要再进行裂解红细胞、染色、洗涤［ 18 ］等步骤，必要时特殊样本应标记死细胞并报告活细胞比例。建议方法学中简述操作步骤，并注明收集的细胞总数［ 1 ， 3 ， 5 ， 12 ， 17 , 18 , 19 ］，若不能及时检验，需注明样本保存条件与时间以及固定剂的来源与浓度。FCM临床项目图文报告示例见图1 , 2 , 3 , 4 ，FCM临床检验报告的方法学描述见图1 、 3 。图1 流式细胞术临床诊断项目中免疫分型的图文报告（文字部分）示例图2 流式细胞术临床诊断项目中免疫分型的图文报告（图片部分）示例［2A~2S为单个活细胞门内不同荧光参数组合图，其中2A为使用CD45 V500-A和侧向散射光-面积设置淋巴细胞门（绿色）、粒细胞门（天蓝色），单核细胞门（棕色）、有核红细胞门（黄色），2B为单个活细胞门内使用CD34 Percp-Cy5.5-A和侧向散射光-面积设置原始细胞门；2T为原始细胞门内使用cCD3 APC-A和CD117 PE-Cy7-A设置原始细胞1门（红色）和原始细胞2门（宝蓝色）。2I的横、纵坐标轴和2R纵坐标轴以指数展示，其他图片所示横、纵坐标均以对数展示］图3 流式细胞术临床诊断项目中微小残留病的图文报告（文字部分）示例图4 流式细胞术临床诊断项目中微小残留病的图文报告（图片部分）示例［4A~4H为单个活细胞门内不同荧光参数组合图，其中，4A为使用CD45 V500-A和SSC-A设置淋巴细胞门（绿色）、粒细胞门（天蓝色），单核细胞门（棕色）、有核红细胞门（黄色）、嗜酸性粒细胞门（浅粉色），4B、4C、4E分别为单个活细胞门内使用CD19 PE-Cy7-A和SSC-A设置CD19门（墨绿色），cCD79a APC-A和SSC-A设置cCD79a细胞门（蓝绿色），CD34 PerCP-A和SSC-A设置CD34细胞门（未用颜色）。为准确评价微小残留病的抗原表达，4I和4J为cCD79a门内细胞，4K~4P为CD19门内细胞，其中，4I为cCD79a细胞门内使用CD38 BV421-A和CD10 PE-A设置微小残留病门（红色），4K为CD19细胞门内使用CD38 FITC-A和CD10 APC-A设置微小残留病门（红色）］共识1 在FCM临床检验图文报告的方法中，建议提供流式细胞仪、分析软件、主要荧光素标记抗体的相关信息，对疾病具有重要诊断价值的抗体需具体到抗体类别和克隆号；其他主要试剂注明厂家或配制方法。推荐强度：强烈建议。共识2 对FCM的样本制备信息予以简单描述，提供主要检验管的荧光素标记抗体组合方案（可在图片中标注），简述关键操作步骤；样本制备完成后，若不能立即上机检验，需注明保存条件与时间；注明收集的细胞总数。推荐强度：一般建议。

## 三、FCM临床检验报告的检验结果与结论

不同检验项目的FCM临床检验报告对于检验结果、图片与结论的展示方式的要求不同：FCM临床诊断项目如免疫分型和MRD需提供完整的检验结果、结论，并附带FCM彩色二维点图。免疫细胞亚群的临床检验报告一般只需提供检验结果（多以表格形式提供，附带健康群体参考区间），除具有明确检验目的或临床截断值的项目，否则一般不提供结论，且无需提供附图［ 3 ， 8 , 9 , 10 , 11 , 12 ］。（一）FCM临床检验报告结果中的术语描述规范 FCM临床诊断项目的检验报告主要描述抗原表达结果［ 1 ， 3 ， 12 ， 17 , 18 , 19 ］，包括抗原表达的比例和强度。其中抗原表达比例的描述涉及阈值，而表达强度的描述涉及内对照细胞群［ 8 , 9 , 10 ， 13 ， 18 , 19 ］。 1.抗原表达的比例：抗原表达分为阳性（简称表达）、部分阳性（简称部分表达）和阴性（简称不表达）3种情况。抗原表达比例的描述涉及阈值（指精确设门后，目的细胞群抗原表达率）（表1 ）［ 9 , 10 ， 13 ， 20 ］；如有研究结果支持，也可采用其他特殊阈值并注明。例如，早期前体T急性淋巴细胞白血病/淋巴母细胞淋巴瘤CD1a和CD8阴性表达要求抗原表达比例低于5% ［ 21 ］；而急性白血病系别判断中，关于髓过氧化物酶阳性的定义为抗原表达比例高于3%~28% ［ 9 ， 13 ］；其他特殊情况，如靶向治疗中涉及的肿瘤细胞靶点筛查，除了描述阳性和阴性结果，还需给出肿瘤细胞特定抗原的表达百分比［ 8 ］。 2.抗原表达强度：需借助内对照细胞群进行评价，内对照细胞群是指在所分析的样本中存在的抗原表达强度已知的细胞，利用这些细胞的阳性和/或阴性表达以及荧光强度作为检验对照值，来评价目的细胞的抗原表达强度［ 1 , 2 , 3 ， 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14 , 15 ］。FCM临床检验报告中，建议使用增强（bright，bri）或减弱（dim）描述病理性细胞（例如恶性、克隆性、异常细胞）的抗原表达强度改变；使用高（high，hi）或低（low，lo）描述非病理性细胞（如免疫细胞亚群和正常内对照细胞）的抗原表达强度差异。（二）FCM临床检验报告中的结果描述 1.FCM临床诊断项目检验报告中的结果描述：FCM临床诊断项目（如免疫分型和MRD）的检验报告需对样本中主要细胞群特别是异常细胞群的百分比及抗原表达情况进行客观描述，同时根据抗原表达情况判断肿瘤细胞、异常细胞群体所代表的血细胞系别和成熟阶段，结合临床信息给出相关疾病诊断或提供倾向性意见，主要包括以下内容。（1）细胞群百分比：包括肿瘤细胞、异常细胞占有核细胞或单个核细胞百分比，必要时提供其占特殊亚群细胞百分比（如恶性浆细胞占总体浆细胞百分比）［ 19 ］，以及其他主要正常细胞群占有核细胞或单个核细胞百分比。（2）肿瘤细胞或异常细胞抗原表达定性描述方式：包括抗原表达比例和抗原表达强度。抗原表达比例描述方式为检验标志物阳性表达（简称表达）、部分阳性表达（简称部分表达）、阴性表达（简称不表达），重要标志物（例如肿瘤靶点抗原、淋巴瘤的ki67和/或CD38）需提供表达百分比，必要时提供单位体积的绝对细胞数；抗原表达强度描述方式为增强（bri）、减弱（dim）、异质性表达（heterogeneous，heter），heter指抗原在阳性表达细胞群上的表达强度呈现延续性，超过1.5个对数级［ 9 , 10 ］；抗原表达强度与内对照细胞群相比，未发生改变的抗原可不予备注［ 3 ， 8 , 9 , 10 , 11 , 12 ］。（3）肿瘤细胞或异常细胞抗原表达强度定量描述方式：FCM使用荧光素标记抗体，荧光强度可在一定程度上定量反映抗原表达强度。描述方式包括平均荧光强度（mean fluorescence intensity，MFI）、中位荧光强度（median fluorescence intensity，MdFI）、几何平均荧光强度（geometric mean fluorescence intensity，GeoMFI），报告多采用MFI或者MdFI进行描述，必要时选择阴性对照细胞或荧光微球进行MdFI或MFI校准［ 1 ， 5 , 6 , 7 , 8 ］。骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性肿瘤等慢性髓系肿瘤可能涉及多个异常细胞群，如髓系原始细胞、分化阶段粒细胞、分化阶段单核细胞、有核红细胞、巨核细胞、淋巴细胞等［ 5 , 6 ］，建议描述各群细胞的比例和抗原表达是否异常。MRD检验报告建议提供获取样本的细胞数量，检验方法的检出限和定量限，以评价检验方法的灵敏度。 2.免疫细胞亚群的结果描述：目前多以表格形式提供检验结果，并附带健康群体参考区间，检验结果脱离参考区间的项目以升高（↑）或减低（↓）警示［ 3 ， 8 , 9 , 10 , 11 , 12 ］。（三）FCM临床诊断项目检验报告的结论 FCM临床诊断项目的检验报告需提供检验结论，即针对检验结果做出相关疾病诊断或疑似诊断，必要时给出进一步检验建议。当怀疑存在影响检验结果准确性的因素时，应在报告结论中，予以提示和建议。共识3 FCM临床诊断项目（如免疫分型和MRD）的检验报告需提供完整的检验结果、结论和FCM彩色二维点图。检验结果需客观描述样本中主要细胞群情况：（1）肿瘤细胞、异常细胞、正常细胞群占有核细胞百分比，必要时描述亚群细胞占某群细胞的百分比甚至单位体积的细胞绝对数；（2）目的细胞群抗原表达比例（阳性表达、部分阳性表达、阴性表达），必要时提供表达百分比；目的细胞群抗原表达强度（bri、dim、heter）；特殊标志物需提供荧光强度（MdFI或MFI），必要时选择阴性对照细胞或荧光微球进行MdFI或MFI校准。结论部分针对检验结果作出相关疾病诊断或疑似诊断，必要时给出进一步检验建议。推荐程度：强烈建议。共识4 免疫细胞亚群检验的临床报告一般只需提供检验结果以及健康群体参考区间，检验结果脱离参考区间的项目以升高（↑）或减低（↓）警示，除具有明确检验目的或临床截断值的项目，否则一般无需提供结论及附图。推荐程度：一般建议。共识5 描述抗原表达比例需参考阈值，目的细胞群抗原表达率≥80%为阳性表达（简称表达），目的细胞群中胞膜抗原表达率为20%~3个时，需使用彩色图片，并用不同颜色代表不同细胞群（图2 、 4 ）。各实验室可按照自身习惯，设置不同细胞群颜色，原则为同一样本的多管组合图，使用不同颜色代表不同细胞群；尽量选择鲜艳的颜色代表肿瘤细胞群或重要的低比例细胞群（如原始细胞群）。若样本中含有2种肿瘤细胞群，要求2种肿瘤细胞群以及背景细胞的颜色设置对比鲜明。一般将低比例、目的细胞群置于图片上层，高比例、背景细胞群置于图片下层；大多数软件具有突出显示某细胞群的功能，在需清楚显示低比例或目的细胞群时，可酌情采用（图2C 、 2F 、 2P~2S 的蓝色粒细胞群）。（五）FCM临床检验报告的组合图片内容 FCM临床诊断项目的检验报告图片常采用多个二维点图形式展示，需提供单个活细胞中各主要细胞群的设门方式、占有核细胞百分比，所有检验标志物在各主要细胞群的表达情况包括：（1）根据设门方案，采用不同颜色代表不同细胞群；部分图片也可选择性显示某一种或某几种细胞群；（2）横、纵坐标要求显示比例尺和坐标轴代表的参数，包括物理参数（FSC、SSC）和荧光素标记抗体及其产生的荧光强度信号；荧光强度的参数一般选择A信号，少数选择H信号；（3）横、纵坐标与原点的距离代表荧光强度的强弱，必要时显示MdFI或者MFI；（4）FCM二维点图上应清楚显示目的细胞群与内对照细胞群的位置关系，并据此判断目的细胞群的抗原表达情况。共识7 FCM临床检验报告图片建议采用彩色二维点图。要求显示比例尺和坐标轴代表参数（包括FSC、SSC、荧光素及标记抗体，上述参数指标产生的强度信号）；一般荧光信号首选A，少数选择H，几乎不选择W。进行有核细胞分析时，检验指标的数值显示方式：FSC一般使用lin，SSC使用lin或log，荧光信号绝大多数使用log、指数或双指数。横、纵坐标离开原点的距离代表信号强度的强弱，必要时显示MdFI或者MFI；图片应清楚显示目的细胞群与内对照细胞群的抗原表达关系。推荐强度：强烈建议。共识8 FCM临床检验报告中应描述设门方法，并提供相对完整的彩色图片。临床诊断图片需依次设置活细胞门和单个细胞门（可选择性显示），并从单个活细胞开始使用CD45和SSC设置各主要细胞群，必要时使用反向设门和序贯设门。推荐强度：强烈建议。共识9 FCM临床检验图片需提供单个活细胞中各主要细胞群的设门方式、占有核细胞百分比以及所有检测抗原在各主要细胞群的表达情况。因肿瘤细胞占有核细胞比例低，导致全图不能清楚显示免疫表型特征时，建议另外提供重点显示肿瘤细胞群与内对照细胞群的图片。推荐强度：强烈建议。共识10 彩色二维点图中，结合设门技术，每个实验室可按照习惯设置不同细胞群的颜色，原则是同一个病例的多管组合图，需使用不同颜色代表不同细胞群；尽量选择鲜艳的颜色代表肿瘤细胞群或重要的低比例细胞群（如原始细胞群）。建议将低比例、目的细胞群群置于图片上层，高比例、背景细胞群置于图片下层，必要时使用软件功能突出显示目的细胞群。代表不同细胞群的颜色应清晰，色彩差别大。推荐强度：强烈建议。

## 五、FCM临床检验报告的审核与签发

FCM临床诊断报告需要具备资质的医师或授权签字人审核后签发，签发者和/或审核者一般由医疗机构根据国家相关要求进行资质确定和能力考核后授权。报告中需注明检验者、审核者、报告时间、实验室地址和联系方式等。以骨髓标本免疫分型和MRD检验为例，对共识中涉及的FCM免疫分型（图1 、 2 ）和MRD（图3 、 4 ）的临床诊断报告予以举例说明。执笔人王卉（河北燕达陆道培医院检验科），刘贵建（中国中医科学院广安门医院检验科），崔巍（国家癌症中心国家肿瘤临床医学研究中心中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院检验科），杨曦明（中国中医药大学东直门医院检验科），陈曼（河北燕达陆道培医院检验科），王慧君（中国医学科学院血液病医院血液病理诊断中心），吴雨洁（南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院血液科）专家组成员（按姓名字母顺序排列）常英军（北京大学人民医院北京大学血液病研究所），常子维（空军军医大学第一附属医院血液科实验室），陈芳（中国医科大学附属盛京医院血液研究室），陈曼（河北燕达陆道培医院检验科），池沛冬（中山大学肿瘤防治中心检验科），崔巍（国家癌症中心国家肿瘤临床医学研究中心中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院检验科），丁丽（解放军空军特色医学中心血液科），段彦龙（国家儿童医学中心首都医科大学附属北京儿童医院儿童肿瘤中心，肿瘤内科），樊华（中国医科大学附属第四医院血液科），付蓉（天津医科大学总医院血液内科），高春芳（上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院检验科），高广勋（空军军医大学第一附属医院血液内科），耿惠（青海大学附属医院血液科），李国盛（山东大学齐鲁医院血液科），李俊明（南昌大学第一附属医院检验科），李力（南部战区总医院血液科），李壹（四川大学华西医院实验医学科），李智伟（新疆维吾尔自治区人民医院临床检验中心），刘贵建（中国中医科学院广安门医院检验科），刘敏（山东第一医科大学附属肿瘤医院检验科），刘耀（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心），刘召云（天津医科大学总医院血液内科），马莉（贵州医科大学附属医院临床检验中心），毛霞（华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科），欧阳涓（中山大学附属第一医院检验科），潘建华（广州金域医学检验中心），庞博（中国中医科学院广安门医院检验科），秦晓明（北京海思特医学检验实验室），曲洪澜（内蒙古林业总医院血液科），全丽娜（哈尔滨医科大学附属肿瘤医院血液科），任方刚（山西医科大学第二医院血液科实验室），桑威（徐州医科大学附属医院血液科），孙慧（山东第一医科大学附属省立医院临床医学检验部），孙士鹏（中国中医科学院广安门医院检验科），唐古生（海军军医大学第一附属医院血液病科），唐湘凤（解放军总医院第七医学中心儿科医学部），汪玄（中国医学科学院北京协和医院血液内科），王爱先（河北燕达陆道培医院检验科），王蓓丽（复旦大学附属中山医院检验科），王斐（中国医学科学院北京协和医院检验科），王宏伟（山西医科大学第二医院血液科实验室），王卉（河北燕达陆道培医院检验科），王慧君（中国医学科学院血液病医院血液病理诊断中心），王建中（北京大学第一医院检验科），王晶石（首都医科大学附属友谊医院血液科），王亮（首都医科大学附属北京同仁医院血液科），王萍萍（中国医科大学附属第一医院血液科实验室），王巍（哈尔滨医科大学附属第二医院血液科），王雅杰（首都医科大学附属地坛医院检验科），吴青青（贵州医科大学附属医院临床检验中心），吴雨洁（南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院血液科），吴重阳（兰州大学第二医院血液科），武坤（昆明医科大学附属第一医院检验科），肖琳（国家癌症中心国家肿瘤临床医学研究中心中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院检验科），徐翀（上海市临床检验中心），徐晓莹（迪安诊断技术集团股份有限公司），许潇天（国家癌症中心国家肿瘤临床医学研究中心中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院检验科），杨曦明（中国中医药大学东直门医院检验科），杨再林（重庆大学附属肿瘤医院血液肿瘤中心），岳保红（郑州大学第一附属医院检验科），詹茜（重庆医科大学附属第一医院临床分子医学检验中心），张爱梅（中国科学技术大学附属第一医院安徽省立医院检验科），张国平（中南大学湘雅医院血液科），张继红（中国医科大学附属盛京医院血液研究室），张玉成（吉林大学中日联谊医院科学研究中心），张忠英（厦门弘爱医院检验科），周茂华（广州医科大学附属番禺中心医院检验科），朱杰（大连医科大学附属第二医院检验科），朱莉（华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科），朱明清（苏州大学附属第一医院江苏省血液研究所），主鸿鹄（首都医科大学附属朝阳医院血液科）参考文献（略）《中华检验医学杂志》2024年报道计划

引用 / 出处

中华检验医学杂志. 流式细胞术临床检验图文报告书写专家共识[S/OL]. 2024.