急性呼吸道传染病多病原监测质量管理专家共识

一、共识制订方法及适用范围

本共识由北京市疾病预防控制中心会同中国疾病预防控制中心、中国医学科学院北京协和医学

院群医学及公共卫生学院、中华预防医学会公共卫生监测专业委员会、中国医学科学院病原生物研究所、中国食品药品检定研究院、相关哨点医院等多家机构共同制订。

(一)共识制订方法

1. 共识工作组:成立共识制定专家组,成员涵盖流行病学、临床医学、病原生物学、实验室检测、质量控制、实验室生物安全等多个领域的专家。

2. 文献检索及其识形成过程:在国家疾病预防控制局政策引导下,通过检索PubMed、中国知网等国内外相关文献,以及国内外机构发布的相关文件、指南、方案,吸纳我国“十一五”“十二五”“十三五”国家传染病重大专项相关科研成果,总结北京等地区呼吸道传染病多病原监测实践经验,撰写共识初稿。共识制定专家组通过召开多轮工作会议,对共识初稿进行深入研讨、修改完善;随后广泛征求了省、市疾病预防控制中心、公共卫生学院、海关、研究院所以及相关专业委员会等领域专家的意见,并开展了共识度调查,最终形成了专家共识终稿。

3. 专家推荐程度:共识度调查专家对每一条共识进行评分,1~5分别为非常不同意、不同意、中立、同意、非常同意。针对单条共识,以评分为5分的专家数量占参与评分专家数量的比例超过80%作为共识标准[4]。

(二)共识适用范围

本共识适用于急性呼吸道传染病多病原监测的疾病预防控制人员、哨点医院医护人员、实验室检验检测人员、实验室质量管理人员、传染病监测关键技术研发人员、公共卫生管理者与研究者。

(三)利益冲突的声明

本共识制订过程中,所有参与本共识专家研讨会的专家和共识工作组成员均已签署书面利益声明,不存在共识相关的利益冲突。

二、技术框架

基于《全国急性呼吸道传染病哨点监测方案

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(试行)》(以下简称国家监测方案)要求、相关科研成果及监测实践,为保障监测科学规范、数据准确可靠,应建立急性呼吸道传染病多病原监测质量控制体系,实施监测对象、样本采集、样本分装、运输和保存、样本检测、检验结果质量保证、实验室生物安全、人员培训和考核及监测数据管理与分析利用等全流程质量控制,为呼吸道传染病监测预警、疫情应急处置、防控策略制订提供重要技术支撑(图1)。

共识1:监测对象、样本采集、样本运输、分装和保存、样本检测、人员培训和考核、实验室生物安全、监测数据管理与分析等应实施全流程质量控制,以保障呼吸道传染病多病原监测科学规范、数据准确可靠(共识度:97%)。

三、监测目的

1. 监测流感、新型冠状病毒感染等多种急性呼吸道传染病的流行趋势,识别急性呼吸道传染病流行等重大公共卫生风险。

2. 监测急性呼吸道传染病主要病原谱构成,以及流感病毒、新型冠状病毒等重点呼吸道病原体变异,开展病原学特征分析,发现病原新型及新病原。

3. 为防范应对潜在大流行病性提供技术支持，为疫情趋势分析研判、疫苗应用研发、药物使用策略以及公共卫生策略评估提供依据。

四、监测对象

(一)哨点医院的选择

急性呼吸道传染病多病原监测(以下简称呼吸道多病原监测)的哨点医院选择应具有代表性,建立分区抽样和审查机制。医院类型、监测诊室严格

按照国家监测方案设立,以保证监测覆盖急性呼吸道感染的不同年龄组人群和病例类型。

共识2:明确哨点医院的覆盖地区和人口,有利于监测结果的解读和利用。对哨点监测系统进行持续质量评估,可识别数据收集、样本代表性及报告流程中的潜在不足,从而提高监测效率和数据可靠性(共识度;97%)。

(二)病例报告

既往监测系统主要依靠医疗机构工作人员对流感样病例/严重急性呼吸道感染(influenza-like illness/severe acute respiratory infection: ILI/SARI)监测病例进行信息收集、汇总和上报。目前,我国国家层面正在持续优化国家传染病智能前置软件,开发与完善自动抓取、统计上报功能,大大提升基层数据采集和上报的效率,为实现传染病“早发现、早诊断、早报告、早隔离、早治疗”的防控要求提供有力支撑[5-11]。

共识3:国家传染病智能前置软件实现病例信息自动获取和报告流程自动化,大大提升基层数据采集和报告效率以及监测数据质量(共识度:100%)。

五、样本采集

呼吸道多病原监测采样的质量控制,是确保样本质量、提高检测准确性的核心环节。

(一)采样对象、采样种类和样本量

1. 时间分布均衡：

(1) 门急诊I1病例:采集发病3d内ILI病例, 原造重复检查时, 做到重复集中进行, 原则上在上半周完成采样量的50%。

(2)住院SARI病例:采集发病1周内的住院

![graph TD\n A1[监测对象] --> A2[哨点医院的选择]\n A1 --> A3[传染病医院大型综合医院儿童医院等]\n A1 --> A4[监测诊室]\n A1 --> A5[内科门诊、发热门诊、儿科门诊呼吸内科病房、儿科病房、ICU]\n A1 --> A6[病例报告]\n A1 --> A7[人工登记国家传染病前置软件]\n A8[样本采集] --> A9[采样对象、采样种类、样本量]\n A8 --> A10[时间分布年龄分布病例类型分布采样种类样本量]\n A8 --> A11[采样质量控制]\n A8 --> A16[采样前质量控制采样中质量控制采样后质量控制]\n A8 --> A17[定期反馈采样质量]\n A8 --> A18[采样质量反馈表]\n A12[样本运输、分装和保存] --> A13[样本分装样本标签]\n A12 --> A14[分装三套标签耐低温、不脱落]\n A12 --> A15[样本包装运送时间]\n A12 --> A19[三层包装系统生物危害标识低温运输]\n A12 --> A20[样本保存]\n A12 --> A21[24 h内:冷藏长期:-70℃以下避免反复冻融]\n A22[实验室设施、设备管理] --> A23[实验室分区]\n A22 --> A24[试剂准备区核酸提取区PCR扩增与产物分析区]\n A22 --> A25[检测设备定期校准和维护]\n A22 --> A26[核酸自动提取仪荧光定量PCR仪封膜仪移液器]\n A27[呼吸道多病原检测] --> A28[样本接收]\n A27 --> A29[生物安全柜内核查数量、状态“人-样-信息”对应样本信息化管理]\n A27 --> A30[样本检测]\n A27 --> A31[核酸提取PCR检测基因测序新发突发、高致病性病原微生物检测]\n A32[检验结果的质量保证] --> A33[内部质量控制]\n A32 --> A34[人员培训仪器校准、维护检测方法试剂验收检测过程质控]\n A32 --> A35[外部质量控制]\n A32 --> A36[能力验证测量审核实验室间比对盲样考核]\n A37[实验室生物安全] --> A38[生物安全防护]\n A37 --> A39[生物安全实验室等级个人防护规范操作]\n A37 --> A40[意外事件应急处置]\n A37 --> A41[样本溢洒应急演练]\n A42[人员培训和考核] --> A43[哨点医院培训]\n A42 --> A44[病例报告培训采样技术培训采样监督考核]\n A42 --> A45[网络实验室培训]\n A42 --> A46[多病原检测手把手培训生物安全培训]\n A47[监测数据管理和分析] --> A48[监测数据信息化管理]\n A47 --> A49[信息化平台结构标准化逻辑校验异常追溯数据安全]\n A47 --> A50[监测信息的分析]\n A47 --> A51[描述性分析统计推断数据利用]\n](1/parseimages/figure18e565b1773c47a0bcb5fe655f505514_0_22.png) 图1 急性呼吸道传染病多病原监测质量控制技术路线框架图

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SARI病例,若样本量不足,放宽至发病10d内病例,需在患者入院3d内采集样本。

2. 年龄分布有代表性：

按照当地人口学分布特点及医疗服务覆盖人群特征,科学设置儿童、成人和老年病例的采样比例,确保各年龄组样本占比合理,以全面反映各年龄群体的感染现状。

3. 病例类型分布均衡:

(1)门急诊ILI病例:合理设定上呼吸道感染和肺炎病例等下呼吸道感染病例的占比(比如2:1),确保两类病例样本分布均衡。

(2)住院SARI病例:采样应包含普通住院病例、重症与危重症病例,覆盖不同病情严重程度的患者。

4. 样本种类匹配:

(1)上呼吸道感染病例:采集咽拭子、鼻咽拭子和鼻咽吸取物等。

(2)下呼吸道感染病例:采集深咳痰液、肺泡灌洗液、支气管灌洗液和呼吸道吸取物等。

5. 样本量足量、稳定:

(1)门急诊ILI病例:每家哨点医院每周采集20份样本。

(2)住院SARI病例:每家哨点医院每周采集10份SARI病例样本;若当周SARI病例不足10例,则对全部病例进行样本采集。

不同呼吸道病原体流行存在季节差异,为精准反映不同病原体的分布特征和病原谱的动态变化,呼吸道多病原监测需确保每月样本量均衡、稳定,以排除样本量波动对不同病原体阳性率的影响[1,3,12]。

共识4:为真实反映急性呼吸道传染病病原谱组成及流行、变异变迁规律,呼吸道多病原监测样本采集应具代表性,并保证足量、稳定的样本量,肺炎等下呼吸道感染病例应采集下呼吸道样本(共识度:97%)。

(二) 采样过程质量控制

1. 采样部位精准及样本足量:

口咽拭子、鼻咽拭子采集严格按照《新型冠状病毒感染防控方案(第九版)》附件12《新冠病毒标本采集和检测技术指南》[13]。口咽拭子应越过舌根到咽后壁或悬雍垂的后侧,力度适中,并适当旋转以增加接触面积,注意避免触及舌部;鼻咽拭子贴鼻孔进入,沿下鼻道的底部向后缓缓深入,待拭子顶端到达鼻咽腔后壁时,轻轻旋转一周后缓缓取出

拭子,样本量需采集≥3ml,拭子样本需确保拭子完全浸润于保存液中,避免样本量不足影响样本检测。

2. 污染防控:

采样时避免拭子接触非目标区域(如鼻孔外侧、口唇),采样后立即将拭子头折断放入无菌采集管,盖紧盖子,防止样本泄漏或干燥。

3. 特殊人群采样质控要点：

儿童与婴幼儿采样按照《儿童呼吸道感染微生物检验标本采集转运与检测建议(病毒篇)》操作[14]。采集口咽拭子时,避免患儿哭闹影响采集到正确部位;采鼻咽拭子时,应先清除鼻腔前端的分泌物,拭子应朝向耳方向而不是头顶方向。

儿童支气管肺泡灌洗部位:影像学及临床提示为局灶性病变,支气管镜应嵌顿在相应病变部位的支气管段进行灌洗;如果为弥漫性/肺间质病变,一般嵌顿在右中叶、右下叶或左肺舌叶进行灌洗。灌洗液量:体重小于20kg,每次灌洗量为1ml/kg;体重大于20kg,每次灌洗量为20ml。合格的灌洗液应达到规定的回收量,不混有血液(红细胞数<10%),不应混有大量上皮细胞(<3%)。

4. 样本标识与送检要求：

信息记录完整性:样本管需标注患者姓名、采 样日期、唯一编号,确保可追溯,可以采用条码形 式,减少手写偏差;同步登记采样人员、检测项目等 信息。

送检要求:标本采集后应在2~8℃条件下保存,24~48h内送至网络实验室;超过48h送检的样本应放于-70℃或以下的超低温冰箱保存,无-70℃或以下的超低温冰箱,可在-20℃冰箱暂存(不超过5d);病原体培养类样本保存条件和时效性要求更高,不建议在-20℃冰箱暂存,应尽快送检。

(三)定期反馈采样质量

建立样本质量反馈机制,实验室对不合格样本注明原因,如样本污染、采样量不足、实验室检测采样质控内标(如核糖核酸酶P:RNase P、RNP)检测不合格等,不同采样人员的阳性率、样本合格率分析,定期反馈给采样部门,持续优化采样流程。

共识5:规范的采样质量控制是实现呼吸道多病原精准检测的前提。医疗机构应对采样人员同质化培训、考核,对采样进行全流程质量控制,并定期反馈采样质量,及时发现问题,持续优化采样流程(共识度:94%)。

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六、样本运输、分装和保存

呼吸道病原体监测的准确性高度依赖于分析前质量控制,样本正确的保存温度与及时的运输能最大限度地保持病原体的感染活性,以及抗原和核酸的完整性,是确保病原分离鉴定与各类检测成功的关键保障。

样本采集应尽快送达实验室,病原体培养类样本时效性要求更高,须优先转运。运输时须使用符合生物安全规定的三层包装系统(初级容器、吸水材料、二级硬质外包装),外包装上应有清晰的生物危害标识,并全程使用2~8℃冷藏包控温运输,确保样本运输安全与质量。

网络实验室收到样本后,根据检测种类和每种检测需要的样本量,至少分装3份:1份用于核酸检测,1份用于分离培养,1份用于复核或平行检测。分装应在生物安全柜内进行,操作者需佩戴个人防护装备,防止样本污染和人员感染。样本分装旨在实现“一管一检”,避免反复冻融。每个分装管上需粘贴清晰、防水的标签,注明患者信息、样本类型及采集日期;样本管标签要耐低温、不脱落,选用前应做-70℃或以下的超低温冰箱或液氮保存测试实验。

样本采集后能在48h内检测,可置于2~8℃冰箱短期保存;48h之内无法检测或长期保存的样本,应置于-70℃及以下的超低温冰箱或液氮中保存。须严格避免样本反复冻融,因每次冻融会导致病原体滴度下降和抗原降解,不利于病原分离、检测和鉴定[15-17]。

共识6:标准化化的呼吸道样本运输、分装和保存流程,是连接样本采集与实验室检测的桥梁,也是保障病原检测乃至整个呼吸道多病原监测质量的关键环节(共识度:94%)。

七、实验室设施和设备管理

(一)核酸检测实验室严格分区

呼吸道多病原核酸检测实验室分3个独立区域:试剂储备和准备区、核酸提取区、扩增和产物分析区。各区域应有明确标识,其设备、试剂及清洁用具等不得混用,人员工作服亦不可交叉使用,防止交叉污染。实验人员进入PCR实验区应严格遵循单一方向顺序,从试剂储备和准备区、核酸提取区到扩增和产物分析区,不得逆向返回,以确保人、样本单向流动,避免污染[18-20]。

(二) 定期校准和维护检测设备

呼吸道多病原检测设备要定期校准和维护,以

保证设备功能正常;有条件的实验室可使用自动化设备,减少人员操作差错。主要设备的维护管理如下:

1. 核酸自动提取仪:

核酸自动提取仪转移液体过程中可能产生气溶胶,易造成样本的交叉污染。在多病原检测过程中,若发现连续的多孔样本为同种病原阳性,在排除聚集性疫情的基础上,应排查是否发生交叉污染,并及时对仪器进行清理消毒或更换处理。如果同批次样本内标和病原体均未检出,应排查核酸自动提取仪是否出现故障。参照《(自动)核酸提取仪校准规范》(JJF 1874-2020)[21],根据使用频率、提取仪性能稳定情况等,建议每年至少校准1次。

2. 荧光定量PCR仪:

荧光定量PCR分析仪因频繁使用可能导致其荧光检测系统灵敏度下降,进而引起实验结果偏差。依据《实时荧光定量PCR仪性能评价通则(GB/T 42753-2023)》[22],建议根据使用频率每年至少校准一次。若仪器经过重大维修或受到强烈震动等情况,需立即进行校准。

3. 封膜:

PCR上机前需对反应板进行封膜。手动封膜时,应使用无痕刮板沿单一方向刮压至少三次,并重点强化边缘,沿板周用力刮压至少两圈,以确保密封性,防止样本挥发。有条件的实验室可使用自动封膜仪封膜,若使用自动封膜仪,要定期消毒压板头。

4. 移液器:

根据《移液器检定规程(JJG 646-2006)》[23],移 液器应每年检定1次;对使用频率高的移液器,应 根据使用频率缩短检定周期。同时,为预防核酸残 留污染,需定期对移液器进行消毒和清洁。

共识7:呼吸道多病原核酸检测实验室应严格分区,检测设备应定期校准和维护,有条件的实验室尽量使用自动化检测设备,以减少人员操作差错(共识度:94%)。

八、呼吸道多病原检测

呼吸道多病原检测相比单一病原检测质量要求更高,不同试剂盒及同一试剂盒中不同病原体的检测灵敏度存在差异。这要求样本质量、试剂性能、仪器状态和人员操作等环节具备更高的稳定性,任何细微偏差均可能引起假阳性或假阴性结果。因此,应始终秉持质量与安全优先于速度的理念,落实每一步的严格质量控制。实验室应根据自

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身检测条件,制定呼吸道多病原检测的标准操作规程及质量控制措施,以确保检测结果的准确与可靠。

(一)样本接收

呼吸道多病原检测实验室接收样本时,需在生物安全柜内打开外包装,核对样本数量与送检信息。若发生样本遗洒,应立即将受污染物品置于安全柜内盛有消毒液的容器中处理。同时,需核查样本标识是否清晰完整,确保样本编码、姓名、采样单位、采样日期、样本类型等信息与患者流行病学资料等基本信息一致,实现“人员-样本-信息”一一对应。有条件的实验室可建立样本信息管理系统,实现从采集、运送、接收、检测、报告到长期保存的全流程信息化追溯。

(二)样本检测

1. 核酸提取:

(1)特殊样品需进行前处理以保证核酸提取效率,例如黏稠的下呼吸道样本则需先经痰消化液彻底消化。消化处理后,样本应呈均匀透明或半透明液体状,无肉眼可见絮状物或团块,且倾斜时液体能顺畅流动。

(2)样本处理须严格遵循“单管操作闭环”原则:每完成一份样本的分装或前处理,应立即盖紧管盖再开始下一份操作;严禁同时开启多份样本,以避免样本暴露过久或交叉污染。

(3)核酸提取须设置阳性对照与空白对照,以验证提取过程是否正常。若对照结果异常,应及时排查原因(如试剂污染、操作失误等)并重新提取。

(4)核酸提取完成后应尽快进行PCR检测;若不能及时检测,须将核酸置于-70℃保存,避免室温下长时间放置导致核酸降解。

2.PCR检测:

(1)PCR反应体系配置:加模板吸样时检查枪头是否成功吸取核酸,避免漏吸、吸量不足等情况;加样完成后应检查枪头,确保枪头无残留液体。

(2)对照设立:核酸扩增实验遵循“三对照”原则:即每个检测批次必须同时包含阴性对照(不含靶核酸的基质,用于监控环境污染和试剂本底)、阳性对照(含有特定低浓度靶核酸的样本,用于确认整个检测体系有效)和空白对照(无模板水,用于监控试剂污染)。所有对照品结果均符合预期,该批次检测结果才可接受。

(3) PCR 扩增:配置完成的PCR板应尽快上机检测,若不能尽快上机,需将 PCR 板置于4℃冰箱

暂存,暂存时间最长不得超过4h,避免长时间低温导致试剂活性下降或核酸降解。上机时,PCR仪的检测软件中应标注每个检测孔对应的样本编号,以保证结果可溯源。PCR仪启动运行后须等仪器显示倒计时后方可离开,防止因机器运行不稳定导致实验中断。

(4)结果判定:在阴性对照与阳性对照结果成立的基础上,样本扩增曲线呈标准“S”型,循环阈值(Cycle threshold,Ct值)小于或等于试剂盒说明书中规定的阳性判定阈值。实验室应设立复测标准,对于可疑结果、临界值结果、内标异常但靶标阳性的结果等,应进行重复检测。

共识8:实验室应制定覆盖样本接收、核酸提取、PCR检测及结果判定等全流程的呼吸道多病原检测标准操作规程与质量控制措施,并确保其得到严格执行(共识度:97%)。

共识9:样本接收须确保“人员-样本-信息”一一对应,并支持全流程追溯;核酸提取与PCR反应须设置阴性、阳性及空白对照,以监控提取效率、试剂污染、样本交叉污染及环境污染等情况(共识度:91%)。

3. 基因测序:

基因测序能够实现精准溯源与分型、监测病原体基因变异、发现未知病原,从而及时预警;也可分析混合感染、检测耐药基因,为临床抗感染治疗提供精准依据。但测序过程易造成实验室环境污染,环境中的基因片段也可能污染样本,导致假阳性结果。因此,实验室应建立基因测序的标准操作规程,并制定各环节的质控标准。

(1)核酸质控:核酸提取后需通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳仪及核酸定量仪,评估核酸的纯度、完整性和浓度,以确保其满足下游建库要求[24]。核酸应分类保存,避免反复冻融。

(2)基因组建库质控:文库构建是高通量测序的重要步骤。RNA建库前需先去除rRNA,构建链特异性文库,以保障转录本来源分析准确性。建议宏基因组和全基因组文库的片段长度控制在300~500 bp(长读长测序可适当延长)[25]。文库构建推荐采用双端唯一标签接头以防范交叉污染,并须严格监控实验操作及试剂中可能引入的微生物污染。

(3)上机前文库质控:上机前需测定文库总浓度,达标后方可上机;并分析片段大小分布,确保主带符合预期[25]。

(4)测序数据质控:一代测序序列峰图应基线

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平整,峰形尖锐、单一且分离良好;确保序列前端信号清晰,末端衰减可控,保证整段读长的可靠性。二代测序数据中的Q30(错误率≤0.1%)碱基比例应不低于85%[26]。同时,需要对数据进行过滤,去除低质量的序列和冗余数据,确保最终数据的质量和可用性。

共识10:实验室应建立覆盖核酸提取、建库、上机前文库及测序数据质控等核心环节的全面基因测序标准操作与质控流程(共识度:94%)。

4. 新发突发及高致病性病原微生物检测:

新发突发及高致病性病原体引起的急性呼吸道感染,早期症状常与其他病原体感染相似,采样时难以鉴别。若后续检出高致病性禽流感病毒、可疑新发病原体、输入性病原体或重要变异株等,须立即上报上级疾病预防控制部门,并组织相关部门及专家开展风险评估。根据评估结果,启动网络实验室进行样本复核、平行检测与基因组测序等鉴定工作。网络实验室应使用首次检测时分装的样本进行复核,以避免样本污染。

若采样时经问诊高度怀疑为新发突发或高致病性病原体感染,应同时采集双份平行样本:一份送常规实验室检测,另一份送指定网络实验室进行平行检测。两份样本应严格分开处理,避免交叉污染。

共识11:呼吸道多病原监测中检出新发突发或高致病性病原微生物,应立即上报上级疾病预防控制部门;网络实验室进行平行检测或鉴定应使用首次检测时分装的样本;采样时高度怀疑新发突发、高致病性病原微生物感染,应同时采集双份平行样本,分别送不同网络实验室进行平行检测(共识度:100%)。

九、检验结果的质量保证

实验室应通过内部和外部质量控制活动确保检验结果的准确性和可靠性[27-31]。

(一)内部质量控制

内部质量控制旨在确保检测的稳定性,衡量密度,是质量控制的基础与核心。实验室应建立覆盖人员、设备、方法、试剂、质控品及检验过程的全要素内部质量控制程序。

1. 实验人员培训：

开展手把手培训、并进行考核(如开展人员比对、留样再测等)。人员比对每年至少完成1次,结果一致性应≥90%[32-33],未达标者需重新培训并考核至合格方可上岗。

2. 仪器校准和维护:

移液器、封膜仪、PCR仪等仪器应根据使用频率定期校准、检定,及时发现并解决问题。具体见第七章节“实验室设施、设备管理”。

3. 检测方法、试剂选择及试剂验收：

在选择呼吸道多病原检测试剂盒时,实验室应采用多种方法(如使用标准毒株、质控品、阳性临床样本进行平行检测比较等)评估其灵敏度与特异性。对不同批次购置的试剂盒,须在验收合格后方可投入使用。

4. 检测过程质量控制：

内部质控可通过以下方法实施：

(1)定期使用呼吸道多病原质控品进行检测,包括有证标准物质、临床阳性培养物、原始样本或核酸、合格商品化质控品等。

(2)采用相同或不同方法进行重复对比检测,结果一致性应≥90%。

(3)对留存样本进行重复检测,其Ct值的变异系数应≤5%。

(4)开展实验室内部比对,包括不同人员与设备间的比较。

(5)分析同一样本所有检测指标间的相关性及一致性。

(6)设置阴性质控、阳性质控及空白对照。阴性及空白对照应无扩增,阳性质控同批次 Ct值的变异系数应≤5%;若超出范围,需验证设备性能及试剂有效性[31, 34-35]。

(二)外部质量控制

外部质量控制旨在确保检测结果的准确性,通过衡量准确度以实现实验室间结果可比。实验室应积极参加能力验证、测量审核、实验室间比对或盲样考核等外部质量控制活动。

呼吸道多病原监测网络实验室应主动参加中国疾病预防控制中心、国家卫生健康委员会临床检验中心、认可委等机构组织的相关能力验证或盲样考核,每年至少1次,并尽可能覆盖全体检验人员,避免仅少数技术骨干参加,从而确保实验室常规检测人员均具备相应能力。

共识12:实验室应根据自身条件建立呼吸道多病原检测内部质量控制程序,保障日常检测结果的准确可靠;同时积极参加外部质量控制活动,包括能力验证、实验室间比对或盲样考核等(共识度:94%)。

共识13:实验室选择呼吸道多病原检测试剂盒时,应验证其性能并选用符合检测要求的试剂;

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不同批次的试剂盒须经验收合格后方可投入使用 (共识度:91%)。

(三)实验室间质评或盲样考核结果不一致的原因分析

网络实验室的上级实验室应对下级实验室开展日常质量控制,包括样本复核、平行检测、留样检测及盲样考核。常见实验室间质评或盲样考核不结果一致的原因见表1。

当室间质评或盲样考核结果不一致时,须启动整改闭环流程,包括:及时复测、原因分析与整改计划、实施整改、效果验证(通过内部比对、阳性标准品或内部质控品检测等方式),并对相关问题事项持续跟踪,防止类似问题再次发生[18, 28, 36]。

共识14:网络实验室应开展日常质量控制,认真查找和分析质控过程中出现结果不一致原因,提出纠正措施,以持续提高网络实验室的呼吸道多病原检测能力(共识度:97%)。

十、实验室生物安全

实验室应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》和《人间传染病的病原微生物目录》在规定的生物安全级别实验室中进行[37-38]。呼吸道多病原的样本检测均在生物安全二级(BSL-2)实验室进行。部分病毒如新型冠状病毒的分离培养在生物安全三级(BSL-3)实验室进行。

呼吸道多病原检测应严格做好个人防护,规范

操作。个人防护包括实验服、手套、帽子、外科口罩或N95口罩、实验专用鞋。工作人员须接受全面的生物安全培训。所有临床样本操作,如分装、核酸提取等,应在生物安全柜内进行。

实验室应制定应急预案和意外事故的处置程序,对所有人员进行培训,确保人员熟悉应急预案,熟练掌握样本溢洒等应急处置流程,确保在突发情况发生时能迅速、规范处置。每年至少组织演练一次。

共识15:完善的生物安全防护与有效的应急处置,是呼吸道多病原监测工作得以安全、有效运行的基石(共识度:97%)。

十一、人员培训和考核

哨点医院每年至少开展一次针对数据上报人员及各科室主管人员的病例定义、上报流程和采样时间等培训;每年至少开展两次核查病例报告,检查上报科室是否齐全、时间是否及时、年龄分组是否规范、各省市上报医院是否完整、采样是否集中等。每年组织医护人员采样技术培训与再培训,制定咽拭子、鼻咽拭子采集操作规程考核表,定期开展实操考核并实时反馈,推动采样规范化。

持续开展实验室检测技术培训班,定期举办手把手教学,覆盖呼吸道多病原检测、结果报告、质量控制和新技术进展各环节,确保人员均具备相应资质,考核合格后上岗。系统实施生物安全培训,深入理解并内化安全要求,将生物安全理念融入检测

表1 实室室室间质量评估或背考核结果不一致的常见原因

|类型|结果不一致的原因| |---|---| |样本原因|(1)样本储存不当,例如收样后在室温下放置时间过长、检测后未及时低温冷冻保存等,导致核酸降解,重复检测结果不一致; (2)首次检测时未及时分装样本、分装过程发生污染、样本复融混匀不充分或反复冻融等,引起核酸降解; (3)运输过程中样本管破裂或管盖未拧紧,与同包装其他样本发生交叉污染; (4)样本条码或标识信息缺失、错误,操作时样本混淆,或上机时样本编码录入错误; (5)加模板时移液器未收到核酸或加样量不足等| |设备原因|(1)核酸提取仪存在污染或提取效率低,导致核酸获得量不足; (2)PCR仪未定期检修校准,造成个别孔受热不均、扩增效率下降; (3)加样设备未校准或消毒,导致加样量不准或样本污染; (4)仪器故障或系统报错未及时识别处理,修复后也未确认其有效性; (5)不同实验室设备性能存在差异,部分PCR扩增仪难以标准检测地区范围样本; (6)实验未严格按试剂说明书设置参数,导致PCR反应程序出现偏差; (7)PCR扩增仪开机后未预热至稳定状态即开始运行,其间也未及时发现扩增异常; (8)机器自动判读可能出现错误,需通过人工复核确保结果准确| |试剂原因|(1)新批号试剂未验收,试剂批次间质量不稳定、或个别指标检测不灵敏; (2)检测指标覆盖不全面、不同试剂盒对各病原体检测灵敏度差异显著、试剂储存环节未严格遵循规范要求; (3)检测中不合理或未正确使用试剂,体系配置不准或错配,未遵守分子生物学分区原则,未在试剂准备区配置体系导致试剂污染; (4)检测过程中未设置阳性对照、阴性对照或空白对照,无法定位出现问题的环节; (5)不同实验室使用的试剂存在差异,各指标的检测灵敏度不一,导致检测结果不一致| |结果判读原因|(1)未严格按照说明书判读结果; (2)不同实验室、检验人员之间的判读结果存在差异,在低浓度或处于灰区的样本中尤为突出,容易造成阴阳性判断不一致; (3)结果上报前未核对项目间的逻辑关系,有的试剂盒检验项目有重叠,可以辅助提示样本检测结果的正确性|

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全过程,通过生物安全考核合格后方可上岗。

共识16:定期开展医护人员病例报告、采样技术培训和再培训;强化网络实验室呼吸道多病原检测技术和生物安全的手把手培训,培训考核合格后方能上岗(共识度:100%)。

十二、监测数据管理和分析

(一)监测数据信息化管理

监测数据需要持续收集、管理与分析,对监测数据进行信息化管理是保证数据安全与数据质量的关键措施。呼吸道多病原监测数据应涵盖人口学资料、发病信息(发病日期、症状、疾病转归等)、样本信息(采样单位、姓名、日期、样本类型等)、实验室检测结果、流行病学调查及干预措施记录(如疫苗接种情况)等。公共卫生部门需制定标准化信息收集流程,实现数据完整、准确采集;充分利用国家传染病智能前置软件,自动采集医院信息系统(hospital information system, HIS)及实验室信息系统(laboratory information system, LIS)数据,提高监测效率和自动化水平。

监测信息平台应建立数据结构标准化、逻辑校验及异常追溯的数据质量控制体系,确保监测数据采集、传输与管理的规范化和一致性。为此,应建立可操作的标准化规范。第一,统一数据结构标准。信息平台需制定统一的数据字典和编码体系,包括病例信息字段、样本编号规则、实验室检测字段等,明确人口学变量、临床特征、检测结果、病原代码等字段及取值范围,确保各哨点医院和网络实验室上传的数据在格式、字段含义及编码体系上的一致性。第二,完善逻辑一致性校验。数据自动接入后,平台可自动执行逻辑一致性验证,如采样日期必须早于检测日期、报告日期不得早于检测完成时间、样本类型与检测项目是否对应、病例年龄与就诊科室是否合理等,对异常数据自动提示或拦截,保证源头数据的真实性与可靠性。第三,构建哨点医院与网络实验室的闭环管理机制。平台可支持异常数据的自动追溯,如样本信息缺失、编号重复、结果与原始记录不符等情况,并向相关单位发送纠错通知,完成核实、更正与再次校验的闭环处理,确保数据从采样、检测到上报均可追踪、可纠偏、可验证,从而提升多病原监测的整体一致性与质量控制水平。第四,关注数据安全与隐私保护。包括分级访问控制、加密传输和数据脱敏处理,确保数据安全与质量。

通过以上标准化和质量控制措施,可系统提升

监测数据的规范性、一致性和安全性,有效实现字段定义准确、值域范围统一、逻辑校验合理、缺失与异常可控,确保数据完整性、准确性与可比性,为传染病风险研判和防控决策提供可靠支撑。

共识17:呼吸道多病原监测需建立统一的信息化平台,整合多源数据并应用智能技术,在保证数据安全和质量的前提下,实现及时、高效的数据采集、处理、管理与分析(共识度:100%)。

(二)监测信息的分析

监测信息分析的目的是指导区域数据驱动的循证公共卫生实践。呼吸道多病原监测数据分析,用于呈现人群、时间和空间分布,概括流行特征与变化趋势;并通过构建统计模型,对总体流行特征进行概率化推测与验证。监测部门还可应用时间序列、空间统计、统计过程控制和回归分析等方法,监测潜在呼吸道传染病暴发与病例时空异常聚集,及时开展预警和干预,降低传染病流行风险与社会影响。

呼吸道多病原监测数据利用与共享是监测数据发挥价值不可或缺的环节,监测信息服务对象包含政府决策部门、医疗机构、公共卫生部门、科研机构、制药与疫苗企业及公众。通过数据共享,哨点医院可优化诊疗流程,提高病例识别和医疗服务效率;公共卫生部门可制定精准防控策略;学术机构可开展科学研究与疫苗研发;公众可提升健康意识和自我防护能力。目前,中国疾病预防中心每周发布“全国急性呼吸道传染病哨点监测情况”,发布呼吸道多病原流行水平,并开展年龄、时间和地区的分层分析,为相关部门信息利用及大众科普、健康提示等提供权威的信息平台。

共识18:呼吸道多病原监测工作应注重结果共享与反馈,服务政府决策、医疗、科研及公众,推动决策优化与科研创新,提升公众健康意识和防控参与度(共识度:97%)。

综上,呼吸道多病原体监测全流程质量控制要做到检测前、检测中、检测后各环节、全要素质量控制。检测前保证监测对象、样本采集要有代表性,样本量足量、稳定;样本运输、保存要确保病原活性,防止外源污染。检测中,仪器设备要定期检定校准,准确核实样本信息、样本标识可溯源;样本检测严格按照标准操作规程操作;持续开展内部质量控制和外部能力验证、实验室间比对,保持检测能力符合监测要求。检测后,监测数据信息化管理,数据分析真实反映流行特征与变化趋势,为政府决策、临床诊断、疫情防控及大众健康科普提供科学

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数据支撑。

十三、展望

国家疾病预防控制局将呼吸道多病原整合到流感、新型冠状病毒感染等急性呼吸道传染病哨点监测体系,在全国开展大规模监测,取得了显著的监测成果。借鉴WHO全球流感监测和应对系统(global influenza surveillance and response system, GISRS)等国内外呼吸道传染病监测经验[39],我国呼吸道多病原监测应进一步加强质量控制体系建设,构建协同、高效、可持续的现代化质量控制体系。(1)建立全国统一的覆盖呼吸道多病原监测全流程的质量管理体系,推动临床机构与疾控系统质量管理体系的融合互鉴,统一质控规范和关键技术环节质控措施,实现检测结果互认互通,一次检测即可用于临床诊断,也可用于传染病监测预警分析;推动跨区域质控互认,有计划地开展区域间实验室间比对和能力验证活动,覆盖医院、疾病预防控制机构、第三方检测实验室等不同系统实验室,客观评价各区域实验室水平,达到不同区域的多病原检测能力可比、结果互认。(2)提高质控技术手段,建立和完善呼吸道多种病原体参考品或质控品研发和评价体系,能够模拟临床真实样本,真实反映实际监测工作中的能力水平;加强质控结果的分析利用,利用AI技术辅助质控,自动分析批量数据之间的偏差、多项目之间关联,发现异常结果及时整改。(3)持续加强实验室能力建设,不断拓展检测病原体种类,提高新发突发、未知病原检测能力;进一步提升监测数据质量管理和分析能力,整合多源数据库,开展多维度综合监测,采用机器学习与网络建模方法以提升监测的时空精度与预警能力[40-41]。

综上,通过政府主导,多部门合作、技术创新,我国呼吸道多病原监测体系和质量管理将进一步提升科学性与前瞻性,为呼吸道传染病的防控和公共卫生决策提供坚实的技术支持与战略保障。

撰写专家组成员(姓按氏拼音排序):

董建平(北京市海淀医院)、龚成(北京市疾病预防控制中心)、韩俊(中国疾病预防控制中心病毒病所)、黄芳(北京市疾病预防控制中心)、扈庆华(深圳市疾病预防控制中心)、李中杰(中国医学科学院北京协和医学院群医学及公共卫生学院公共卫生应急管理创新中心、中华预防医学会公共卫生监测专业委员会)、刘建华(宜昌市疾病预防控制中心)、罗明(北京市疾病预防控制中心)、任丽丽(中国医学科学院北京协和医学院病原生物研究所)、索罗丹(北京市疾病预防控制中心)、宋猛(山西省疾病预防控制中心)、王健伟(中国疾病预防控制中心)、王全意(北京市疾病预防控制

中心)、王哲(杭州市疾病预防控制中心)、谢正德(首都医科大学附属北京儿童医院)、谢会(北京市疾病预防控制中心)、许四宏(中国食品药品检定研究院)、杨维中(中国医学科学院北京协和医学院群医学及公共卫生学院公共卫生应急管理创新中心)、于磊(首都儿科研究所)、张澍田(首都医科大学附属北京友谊医院)

利益冲突 所有作者声明无利益冲突

志谢 感谢国家疾病预防控制局“呼吸道多病原监测工作质量管理体系建设项目”的资助和政策支持和首都卫生发展科研专项项目(首发2024-1G-3015)的资助;感谢开展呼吸道多病原监测的省、市在实践中积累并分享的宝贵经验;感谢各相关疾病预防控制中心、公共卫生学院、海关、研究院所及中华预防医学会公共卫生监测专业委员会等机构的相关专家对共识度调查提出的指导意见

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