专家共识丨单分子实时测序在地中海贫血精准防控中的临床应用专家共识(2025版)

专家共识 血液科 · 2025 · 中华医学期刊网

一 适用范围

【推荐意见1】单分子实时测序技术可用于地贫携带者筛查、产前诊断、新生儿筛查以及患者诊断，以满足临床对地贫基因进行快速、准确检测的需求。(投票专家54人，赞成54票、反对0票、弃权0票) 1.1　适用人群 (1)携带者筛查：对于血液学指标高风险(血常规检查显示小细胞低色素或血红蛋白电泳结果异常)的孕前或孕早期夫妇，在充分知情的前提下，可将单分子实时测序作为地贫基因检测方法的选项。对于地贫高发地区的孕前或孕早期夫妇，在充分知情的前提下，可将单分子实时测序作为一线的携带者筛查方法供其选择。 (2)产前诊断：对具有重型地贫生育高风险、有介入性产前诊断需求的家庭，在充分知情的前提下，可将单分子实时测序作为产前诊断的方法。 (3)新生儿筛查：对于地贫高发地区的新生儿，在其父母充分知情的前提下，可将单分子实时测序作为地贫基因的检测方法供其选择。 (4)患者诊断：对于血常规或血红蛋白电泳筛查结果为阳性的新生儿、儿童、成人或家庭成员，可将单分子实时测序作为一线的地贫基因检测方法供其选择。 1.2　慎用人群 对于近期曾接受全血、白细胞成分输血或者造血干细胞移植的就诊者，直接检测外周血样可能会影响地贫基因检测结果的准确性。对于全血或白细胞成分输血者，建议采集其他组织细胞、如口腔黏膜脱落细胞等进行检测，或在4~6个月后采集外周血样送检。对接受过骨髓造血干细胞移植者，建议采集其他组织细胞、如口腔黏膜脱落细胞等进行检测，不建议通过外周血进行地贫基因检测。 1.3　检测变异范围 【推荐意见2】单分子实时测序技术应明确检测中国人群α-和β-地贫致病性明确的热点变异(在对应类型总阳性位点中占比≥ 1%)和常见变异(在对应类型总阳性位点中占比 【推荐意见3】单分子实时测序技术建议检测中国人群α-和β-珠蛋白基因致病性明确的罕见变异(在对应类型总阳性位点中占比C)(HBB: c．-50A>C)、-32(C>A)(HBB: c．-82C>A)、-30(T>C)(HBB: c．-80T>C)、IVS-I-1(G>A)(HBB: c．92＋1G>A)、IVS-I-5(G>C)(HBB: c.92＋5G>C)、CD31(CTG>-TG)(HBB: c．94delC)和CD37(TGG>TGA)(HBB: c．114G>A)非常罕见(在β-地贫所有阳性位点中占比 (3)δ-珠蛋白基因的相关变异 δ-珠蛋白基因的变异通常不会导致小细胞低色素的表型，但会降低Hb A2的表达。当合并β-地贫时，δ-地贫可能会掩盖β-地贫引起的Hb A2升高，从而导致漏检，因此检测δ-珠蛋白基因的变异也具有重要的临床意义。中国人群δ-珠蛋白基因的热点变异包括-77(T>C)(HBD: c．-127T>C)、-44(G>A)(HBD: c．-94G>A)、-30(T>C)(HBD: c．-80T>C)、CD10(GCT>-CT)(HBD: c．31delG)、CD42(TTT>CTT)(HBD: c．127T>C)、CD87(CAG>TAG)(HBD: c．262C>T)、CD116(CGC>TGC)(HBD: c．349C>T)；常见变异包括-68(C>T)(HBD: c．-118C>T)、Init CD(ATG>ATA)(HBD: c．3G>A)、CD4(ACT>ATT)(HBD: c．14C>T)、CD7(GAG>TAG)(HBD: c．22G>T)、CD15(TGG>CGG)(HBD: c．46T>C)、CD27(GCC>TCC)(HBD: c．82G>T)、IVS-I-3'(AG>-C)(HBD: c．93-2delA)、CD44(TCC>TGC)(HBD: c．134C>G)、CD98(GTG>ATG)(HBD: c．295G>A)、IVS-II-894(C>T)(HBD: c．316-5C>T)、IVS-II-897(A>C)(HBD: c．316-2A>C)；罕见变异包括IVS-I-128(G>C)(HBD: c．93-1G>C)、CD14(CTG>CCG)(HBD: c．44T>C)、IVS-I-2(T>C)(HBD: c．92＋2T>C)、IVS-II-1(G>A)(HBD: c．315＋1G>A)、CD113(＋TG)(HBD: c．341_342dupTG)、CD141(CTG>CCG)(HBD: c．425T>C)、CD142(GCT>GTT)(HBD: c．428C>T)等。

二 检测前咨询与知情同意

在采用单分子实时测序技术进行地贫基因检测之前，应为就诊者或其家属提供详细的遗传咨询，了解其家族史、患病史及检测的目的，告知检测的必要性、流程、可能的结果及意义，包括检测的适用范围、目标疾病、检测方法、费用、检测周期、局限性及相关风险等。应告知检测后可能需要的进一步检查和随访，以及可能影响检测结果的因素，如样本采集和处理过程中的注意事项等，其要点包括： (1)应充分了解就诊者或夫妇双方的籍贯、既往史、孕产史、家族史、可疑的地贫临床指征和实验室检查结果等信息，以准确判断其是否属于适用人群； (2)应向就诊者及其亲属详细说明检测的意义、适用人群、检测范围、检测方法与流程、费用、准确性、局限性、检测周期、相关风险等信息，并告知检测后遗传咨询与后续可提供的干预方案，如胚胎植入前遗传学检测、产前诊断等。在产前诊断时，应强调排除母源污染以及阳性结果需通过两种检测方法确认的重要性，并提醒即使检测结果无明显异常，仍无法完全排除胎儿患地贫之外的其他疾病的可能性，孕妇需定期接受常规的产前检查，完成对于其他疾病的系统性筛查，确保实现对胎儿健康状况的全面评估； (3)应向患者强调可能检出无症状携带者。这类个体虽无罹患地贫的风险，但其后代可能携带地贫基因变异，应告知其接受遗传咨询的重要性； (4)应向孕妇及其亲属说明可能影响检测结果的因素； (5)应告知孕妇医疗机构或检测机构将对其妊娠结局进行随访； (6)应向就诊者承诺检测数据将仅用于医学目的，并严格保护个人隐私，避免基因歧视； (7)在检测前需详细询问患者近期是否曾接受输血或造血干细胞移植； (8)孕妇及其亲属应在充分知情的前提下进行自主选择，签署知情同意书、送检单等文件。

三 规范化样本检测与报告

【推荐意见6】单分子实时测序技术在临床地贫检测中应遵循标准化的操作流程和质量控制体系，涵盖样本采集、运输存储、基因组DNA提取、测序分析及质量控制等环节，以确保检测结果的准确性和可靠性，满足临床诊断和筛查的需求。(投票专家54人，赞成54票、反对0票、弃权0票) 【推荐意见7】单分子实时测序检测到的地贫变异解读建议参考LOVD-China、HbVar、Ithanet、LOVD、《α-地中海贫血的临床实践指南》、《β-地中海贫血的临床实践指南》等国际权威公共数据库和临床实践指南，并定期及时更新地贫相关基因变异数据库。(投票专家54人，赞成54票、反对0票、弃权0票) 【推荐意见8】当出现不同数据库对地贫基因变异致病性评级不一致时，建议建立专业小组协同审核，结合临床实践经验，综合确定变异的致病性。(投票专家54人，赞成54票、反对0票、弃权0票) 3.1　样本采集、运输和存储 采集过程按照无菌操作要求，选择合适的容器，对不同类型的样本应按照不同的要求和标准进行采集，包括但不限于外周血、干血片、羊水、脐带血、基因组DNA等，并采集足够量。血液样本优先推荐使用EDTA抗凝剂采血管，避免样本凝血、污染或降解。应根据不同样本类型的温控条件进行包装和运输(表3)，以确保样本的质量。 样本送达实验室后，应检查原始样本标识、采血管类型、采集量、运输条件、样本状态以及样本信息与知情同意书内容的一致性。在检测前应控制样本的质量，根据不同检测平台的要求制定适宜的样本合格及拒收标准，并进行恰当的处理，同时标记受检者的唯一标识、避免样本混淆，并保护受试者的个人信息。合格样本应及时检测，待检DNA在24 h内检测者可置于2 ~ 8 ℃保存；24 h内无法检测者应置于-20 ℃及以下冰箱内保存，避免反复冻融，以保证DNA的质量和稳定性。 3.2　基因组DNA提取、文库 构建、上机测序和数据分析 3.2.1　实验操作规范 按照单分子实时测序地贫基因检测试剂盒说明书的要求，选择合适的基因组DNA提取试剂和纯化试剂。严格遵循试剂盒操作手册进行基因组DNA提取、PCR扩增、文库构建、纯化和混合(pooling)操作。在实验过程中应设立阴性和阳性对照，与常规样本同步检测。按照单分子实时测序仪测序说明书的要求对文库进行测序。测序完成后，将分析得到的HiFi读序(HiFi reads)与参考基因组GRCh38版本进行比对，得到地贫基因区域的读序，并采用经大量临床研究验证过的生物信息学分析流程，获得珠蛋白基因变异的准确清单。 3.2.2　实验室管理与环境要求 应遵守国家卫健委颁布的《医疗机构临床基因扩增管理办法》及相关的生物安全法规，确保测序区域满足设备运行所需的洁净度、温/湿度、防震及光照条件，实时监控环境参数。实验分区明确，各区域仪器设备、耗材专用，避免混用，防止交叉污染。 3.2.3　质量控制体系 应建立全流程的标准操作程序，涵盖检验流程、设备维护、试剂验收等环节，确保结果真实、准确、可重复。应制定室内质控标准，实验的各个环节在通过质控后方可继续。若参数未达标，则应暂停或重复实验，避免低质量的数据影响分析。 3.3　变异解读 实验室应参考人类基因组GRCh38版本和LOVD-China、HbVar、Ithanet、LOVD、《α-地中海贫血的临床实践指南》、《β-地中海贫血的临床实践指南》等权威公共数据库和临床实践指南进行变异解读，并定期更新地贫数据库的信息，以确保变异解读的准确性。 3.4　报告撰写 检测报告需包含患者的基本信息、检测结果、结果建议、检测人、审核人和报告日期等。对于检测发现的变异，应结合临床信息进行确认。检测报告需由具备相关资质者进行双人核对审核后方可签发，以确保受检者信息和检测结果的准确性、可溯源性以及报告的规范性。

四 检测后的遗传咨询和干预

【推荐意见9】所有受检者在检测后均应接受遗传咨询，检测报告需由医师结合家系成员和临床情况进行综合分析。(投票专家54人，赞成54票、反对0票、弃权0票) 地贫个体的基因型和表型均具有高度的异质性，所有受检者在检测后均应进行遗传咨询，检测报告需由医师结合家系成员和临床情况进行综合分析。基因检测结果为阴性时，需充分考虑检测方法的局限性，同时关注检测范围之外的残余风险。 4.1　携带者筛查 提供地贫携带者筛查服务的临床机构应向受检者提供书面报告及相应的遗传咨询，包括检测范围内致病性或可能致病性变异的携带情况、对应的疾病表型、遗传方式、子代患病的风险以及后续的临床建议等。对于接受序贯筛查的夫妇，若先行检测的一方被发现为地贫携带者或患者，则应尽快对其配偶行全面的基因检测，以确定该夫妇的生育风险并提供遗传咨询。 4.2　产前诊断 具有重型地贫生育高风险的夫妇在怀孕后需接受产前诊断。对于产前诊断为重型地贫的胎儿，在确诊后应与其双亲沟通，在知情同意和符合伦理的前提下选择终止妊娠，以减少重型地贫患儿的出生。建议将中间型α-地贫(Hb H病)及中间型β地贫(β＋/β＋，α-三联体或α-四联体合并β0或β＋变异杂合子)纳入高危妊娠管理，进行密切的监测。 4.3　新生儿筛查 对于新生儿筛查所发现的地贫患儿，应尽快进行地贫基因检测和临床诊断分型，加强长期管理和随访，制定个性化的治疗方案和生活指导，对于中重型地贫患儿，应提供早期干预和治疗的措施(如输血治疗、铁螯合剂治疗、造血干细胞移植等)，同时关注其心理健康和社会支持，改善患儿的生活质量和预后。对于地贫高发地区筛查阴性的新生儿，需建立风险分层管理档案，建议在6、12、24月龄进行生长发育评估及血液学指标追踪，重点监测铁代谢的变化。 4.4　患者诊断 应根据患者的临床表现、血常规、血红蛋白电泳以及基因检测的结果进行综合诊断和分型。对诊断为阳性者，需明确患者为静止型、轻型、中间型还是重型地贫，同时根据检测结果和疾病分型制定个性化的治疗方案。对中间型和重型地贫患者，可能涉及规范性输血、祛铁治疗、脾切除等综合干预措施。定期对患者进行随访，监测病情变化、治疗效果及并发症的发生，及时调整治疗方案。此外还应关注患者及其家属的心理状态，提供必要的心理支持和辅导，应对疾病带来的压力。

五 局限性

【推荐意见10】单分子实时测序技术尽管对于地贫基因检测具有明显的优势，但也存在一定的局限性，包括检测范围、样本要求和变异解读等方面，需在实际应用中加以关注和解决。(投票专家54人，赞成54票、反对0票、弃权0票) 5.1　技术局限性 通过特异性引物组实现检测区域内基因全长的全谱变异覆盖，基于长片段PCR扩增的靶向单分子实时测序技术能够同时检测包括点突变、插入缺失、重复、缺失、复杂重组等全部类型的数百种变异，但受限于引物的覆盖度，引物组结合区外的极罕见结构变异仍不在常规的检测范围内。这类罕见的情况需根据临床需要，结合单体型缺失的信息提示，并通过临床验证后优化引物设计方案来实现更全面的覆盖。 (1)缺失变异类型：在罕见情况下，如果发现不在检测体系范围内的缺失，可通过增加跨越断裂点的PCR引物实现更全面的检测。在极罕见的情况下，α-珠蛋白基因簇存在始于16p末端的大片段缺失变异类型，由于无法设计跨越断裂点的PCR引物，导致其在常规的检测范围之外，需通过单体型缺失的信息进行推测。 (2)重复变异类型：由于PCR扩增的长度局限和长短片段扩增偏好，难以直接检测> 20 kb的大片段重复的断裂点，需通过单体型异常的信息进行推测。 5.2　样本要求的局限性 由于靶向单分子实时测序技术的平均测序靶标片段深度可达500 ~ 1 000×，检测灵敏度很高，有可能检测出样本中占比5%的基因组DNA基因型。因此需要在检测过程中控制样本的交叉污染，在产前诊断中严格排除母源污染，并建议通过家系检测结合双亲样本的单体型信息进行分析，以最大限度地排除母源污染对结果的干扰，同时还应考虑样本嵌合的可能性。 5.3　变异解读的局限性 部分检测到的基因变异在现有数据库和文献中缺乏明确的致病性评估信息，难以确定其与地贫表型的相关性，给临床诊断和遗传咨询造成了一定的困难。在知情同意书中应进行告知，并基于报告生成时的数据库版本所涵盖的基因变异进行相应评级。同时需要特别说明，由于基因检测领域医学研究的持续进展，包括但不限于变异致病机制研究、临床案例积累及专业数据库版本更新等因素，可能导致对受检者变异的致病性判定结论发生变化，这类学术进展将不受原始检测报告时效的约束。另外，由于个体的差异和修饰基因的存在，也会导致地贫基因型和表型的对应关系存在一定的不确定性，因此检测须在患者对其局限性充分知情的前提下进行。

六 在线资源

https://globin.bx.psu.edu/hbvar/menu.html https://www.ithanet.eu http://databases.lovd.nl/shared/references/ http://www.genomed.zju.edu.cn/LOVD3/genes https://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/ https:/www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/ https://omim.org/ 参与本共识执笔、审定及德尔菲问卷设计和修改的专家名单： 尹爱华(广东省妇幼保健院医学遗传中心，广东省产前筛查与产前诊断工程研究中心，广州市产前筛查与产前诊断重点实验室)；马燕琳(海南医科大学第一附属医院，海南省人类生殖与遗传重点实验室，海南省地方病(地中海贫血)临床医学研究中心，生殖健康及相关疾病研究与转化教育部重点实验室)；桂宝恒(广西医科大学第二附属医院遗传与基因组医学中心，广西卫健委医学遗传与基因组学研究重点实验室)；邬玲仟(中南大学生命科学学院医学遗传学研究中心，医学遗传学湖南省重点实验室，儿科罕见病教育部重点实验室) 参与本共识讨论、修订及德尔菲问卷投票的专家名单(按拼音字母顺序排序)： 陈剑虹(惠州市第一妇幼保健院)；陈萍(广西医科大学第一附属医院)；杜丽(广东省妇幼保健院)；高媛(山东大学附属生殖医院)；桂宝恒(广西医科大学第二附属医院)；何建萍(昆明市妇幼保健院)；何升(广西壮族自治区妇幼保健院)；贺骏(长沙市妇幼保健院)；黄盛文(贵州省人民医院)；蒋燕(重庆市妇幼保健院/重庆医科大学附属妇女儿童医院)；李东至(广州市妇女儿童医疗中心)；李浩贤(江门市妇幼保健院)；李荣(重庆医科大学附属第一医院)；李荣(南宁市第二人民医院)；李友琼(广西壮族自治区人民医院)；梁德生(中南大学生命科学学院)；林忠(广西壮族自治区生殖医院)；刘百灵(柳州市妇幼保健院)；刘静(长沙市妇幼保健院)；刘俊涛(中国医学科学院北京协和医院)；刘青松(成都市妇女儿童中心医院)；刘珊玲(四川大学华西第二医院)；刘文兰(深圳市妇幼保健院)；刘晓芳(遂宁市中心医院)；刘彦慧(深圳市罗湖区人民医院)；刘颖迪(湖南家辉遗传专科医院)；龙驹(钦州市妇幼保健院)；马燕琳(海南医科大学第一附属医院)；潘卫(贵州医科大学附属医院)；彭莹(湖南省妇幼保健院)；裘娟(深圳市龙华区妇幼保健院)；宋婕萍(湖北省妇幼保健院)；覃运荣(玉林市妇幼保健院)；唐小华(浙江省人民医院)；王华(湖南省儿童医院)；汪雪雁(四川省妇幼保健院)；邬玲仟(中南大学生命科学学院)；吴学东(南方医科大学南方医院)；夏爱华(北海市人民医院)；徐两蒲(福建省妇幼保健院)；严提珍(东莞市妇幼保健院)；杨季云(四川省人民医院)；姚宏(重庆医科大学附属第二医院)；尹爱华(广东省妇幼保健院)；余蕾(贵阳市妇幼保健院)；张呈生(南昌大学第一附属医院)；张春华(云南省妇幼保健院)；章锦曼(云南省第一人民医院)；张锐(深圳市宝安区妇幼保健院)；张新华(中国人民解放军联勤保障部队第九二三医院)；周俏苗(海南省妇女儿童医学中心)；周祎(中山大学附属第一医院)；周裕林(厦门市妇幼保健院)；朱春江(桂林医学院附属医院) 点击左下角“阅读原文”，获取更多文章信息 来源：中华医学遗传学杂志 编辑：李岭 初审：沈锡宾 终审：刘冰

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引用 / 出处

中华医学期刊网. 专家共识丨单分子实时测序在地中海贫血精准防控中的临床应用专家共识(2025版)[S/OL]. 2025.